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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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博克侬浮码

银虫 (小有名气)

[求助] 怎样用乙醇沉淀的方法纯化酶切体系中的DNA 已有1人参与

听说乙醇沉淀法可以很好的纯化单酶切体系中的DNA,希望能给出具体的方案!
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luwei13566

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
博克侬浮码(西门吹雪170代发): 金币+3, 鼓励回帖交流 2014-07-24 09:35:32
(1)加入1/10体积的3M 醋酸钠(pH 5.2)于DNA溶液中,使其最终浓度为0.3 M。
(2)加入2.5倍体积无水乙醇混合后,置于-20度 中30~60分钟(若DNA小于1kb或量比较少时,应把溶液放在-70 下2小时,若DNA小于200 bp时,加入10 mM MgCl2 有助于DNA回收。)
(3)12,000 rpm离心10分钟,小心倒掉上清液,管底沉淀75%乙醇漂洗一遍
(4)12000 rpm离心10min,小心倒掉上清液,真空干燥,加入适当的TE buffer或者水溶解。
(5)取1ul测定浓度,其余的分装保存。

注意
1.你DNA的量越大乙醇沉淀效果越好,DNA的量越小损失率越大,甚至加了无水乙醇冰置后肉眼看不到沉淀
2.离心后倒上清不注意容易把沉淀也给倒出去导致最后啥也没有
3.弃去上清和干燥不彻底,导致样品中有乙醇干扰。
大家相互帮助哈
2楼2014-07-23 19:37:43
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博克侬浮码

银虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by luwei13566 at 2014-07-23 19:37:43
(1)加入1/10体积的3M 醋酸钠(pH 5.2)于DNA溶液中,使其最终浓度为0.3 M。
(2)加入2.5倍体积无水乙醇混合后,置于-20度 中30~60分钟(若DNA小于1kb或量比较少时,应把溶液放在-70 下2小时,若DNA小于200 bp时,加入 ...

学习了,谢谢
3楼2014-07-24 09:19:12
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