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博克侬浮码银虫 (小有名气)
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怎样用乙醇沉淀的方法纯化酶切体系中的DNA 已有1人参与
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| 听说乙醇沉淀法可以很好的纯化单酶切体系中的DNA，希望能给出具体的方案！ |
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luwei13566
木虫 (正式写手)
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【答案】应助回帖
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(1)加入1/10体积的3M 醋酸钠（pH 5.2）于DNA溶液中，使其最终浓度为0.3 M。 (2)加入2.5倍体积无水乙醇混合后，置于-20度 中30~60分钟(若DNA小于1kb或量比较少时，应把溶液放在-70 下2小时，若DNA小于200 bp时，加入10 mM MgCl2 有助于DNA回收。) (3)12,000 rpm离心10分钟，小心倒掉上清液，管底沉淀75%乙醇漂洗一遍 (4)12000 rpm离心10min，小心倒掉上清液，真空干燥，加入适当的TE buffer或者水溶解。 (5)取1ul测定浓度，其余的分装保存。 注意 1.你DNA的量越大乙醇沉淀效果越好，DNA的量越小损失率越大，甚至加了无水乙醇冰置后肉眼看不到沉淀 2.离心后倒上清不注意容易把沉淀也给倒出去导致最后啥也没有 3.弃去上清和干燥不彻底，导致样品中有乙醇干扰。 |
2楼2014-07-23 19:37:43
博克侬浮码
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100