版块导航: 正在加载中...

客户端APP下载

登录注册

应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜

当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

董庄青年

新虫 (初入文坛)

应助: 1 (幼儿园)
金币: 5.5
散金: 1
帖子: 28
在线: 19.8小时
虫号: 3252314
注册: 2014-06-03
专业: 生物化学

[求助] PCR目的条带太弱并无非特异性条带怎样改进可以使目的产物的量加大已有7人参与

最近做PCR很郁闷  如图：目的条带（上面  浅浅的）太弱    引物二聚体（下面)很亮
PCR条件优化时要么带很浅  要么没有带最后优化成下图所示  带一直很浅  求解先谢谢各位！！！
引物是生工刚合成的模板是新提的带都很亮
PCR体系(25ul)：10×buffer: 2.5ul    dNTP-MIX(10mM): 0.5ul    引物（10um)：各1.5ul       模板（4kb): 1ul（150ng左右） Tap DNA Polymerase(5U/ul):  0.5 ul 水:17.5ul
PCR程序：94℃  5min; 94℃  1min; 58℃ 1min;72℃ 6min;72℃  10min；共20个循环:

:cat39

PCR目的条带太弱并无非特异性条带怎样改进可以使目的产物的量加大

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

分子生化实验经验积累

核酸生物学实验经验

Enjoy my life！

» 猜你喜欢

为什么蛋白质氨基酸测定大家都测17种? 已经有5人回复
《灰分记：我与坩埚的“灰烬”之恋》已经有3人回复
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费? 已经有244人回复
求助食品检验工（基础知识），中国劳动社会出版社电子版已经有5人回复
胶体几丁质的结晶度？已经有0人回复
诚挚招收全日制博士！！！中国农业科学院麻类研究所谭志坚研究员课题组招收博士已经有2人回复
三甲基羟乙基丙二胺的合成路线已经有5人回复

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

电泳图引物条带很亮，目的产物条带不亮已经有8人回复
全长PCR扩增的非特异性条带去不掉咋办已经有4人回复
求助，3’RACE无目的条带只有2000bp左右的非特异性条带扩增！已经有3人回复
半年了，16S rDNA V3区PCR产物弥散，疑似比目的条带大一些些的杂带？已经有7人回复
race pcr问题，没有特异性条带已经有7人回复
V3区pcr出现非特异性条带怎么办？已经有6人回复
PCR产物非特异性条带的去除已经有14人回复
PCR扩增非特异性条带求解已经有5人回复
第一次PCR产物电泳没有条带，请问用同一条引物跑2次PCR，能跑出条带吗？已经有13人回复
PCR扩增的特异性条带是啥意思？已经有9人回复
PCR非特异性条带已经有15人回复
SOE pcr目的条带很暗，非特异条带很亮？已经有10人回复
PCR产物的电泳条带出问题了！加了oading buffer和不加loading buffer的大小不一样！！已经有12人回复
PCR后电泳是特异性条带，但测序总是出现结合问题。怎么办？已经有9人回复
PCR目的条带没跑出，但是跑出了特异性很强的单一条带，是什么原因呢？已经有9人回复
如果目的条带跟非特异扩增的条带太近能回收吗已经有8人回复
PCR延伸时间短可以P的更加明显，且pCR产物量大条带会下坠已经有0人回复
PCR后电泳，有目的条带，也有非特异性条带，可以切胶纯化进行下一步实验吗？已经有2人回复
【求助/交流】PCR产物切胶回收，总是有一条杂带的大小是目的片段的两倍大小已经有8人回复
【求助/交流】PCR后没有目的条带，有非特异性条带，求解决办法？？已经有20人回复
【求助/交流】PCR后的DNA产物跑电泳久了条带为什么会消失或变弱？已经有12人回复

1楼2014-07-16 10:55:17

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

xzy0425

新虫 (初入文坛)

应助: 8 (幼儿园)
金币: 203.8
红花: 1
帖子: 26
在线: 13.8小时
虫号: 3256303
注册: 2014-06-05
性别: GG
专业: 生物化学

★ ★
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2014-07-17 12:20:10

既然合成产物以引物二聚体居多，你应该着重考虑引物方面，不妨降低引物用量为1μl，增加底物用量为1μl；同时避免使用同源引物，以免出现引物二聚体。又因为目的条带过于浅淡，说明目的条带合成量少，可以通过增加循环数来获得大量目的条带。

23楼2014-07-17 09:04:18

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

相关版块跳转我要订阅楼主董庄青年的主题更新