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nieqiantina

银虫 (初入文坛)

[求助] 我的蛋白电泳图,这样的,求高手指导。 已有7人参与

两边的marker每次都是歪的,都向外面倾斜,蓝色的没跑成一条直线,且一边快一边慢,是由于胶的浓度不均匀的原因吗,那怎么才能均匀。谢谢!!!!

我的蛋白电泳图,这样的,求高手指导。
20140710_171139.jpg
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

凌波丽

专家顾问 (知名作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
youlinglyw: 金币+5, 赠人玫瑰手有余香,生物科学有你更精彩! 2014-07-10 22:53:40
电泳条带歪斜,一般是因为:
1.凝胶制备不好,导致胶的密度或交联程度不均匀。
2.点样孔倾斜,全都往一个方向偏,可能是梳子插入时就插倾斜了。
3.可能凝胶的底部与玻璃板接触的面上可能有气泡。
4.凝胶制备时可能没有在凝胶未聚合前保持水平或静止,导致凝胶厚度不一致。
2楼2014-07-10 18:20:22
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普通回帖

凌波丽

专家顾问 (知名作家)

【答案】应助回帖

更正:4.凝胶制备时可能灌制凝胶的模具的两块玻璃板不平行,导致凝胶厚度不一致。
3楼2014-07-10 22:35:46
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凌波丽

专家顾问 (知名作家)

【答案】应助回帖

补充:
5.缓冲液凝胶条或者点极放置不平行。
4楼2014-07-10 22:37:08
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Crocodile-YK

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

估计是没有混匀体系,也没有脱气,就急忙忙地上胶了,不用怕,胶不会那么快就凝结的。或者把诱发剂减量,延长交联时间。
自然如此美丽!
5楼2014-07-14 09:55:15
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pengchenping

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

我觉得最主要的应该是你的胶没有混匀,配胶不应该没有压平还把浓缩胶灌上去吧。另外也有可能是你用水封的时候力道太大且不均匀,导致右边的胶被稀释啦

[ 发自小木虫客户端 ]
6楼2014-07-14 12:33:57
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jurkat.1640

至尊木虫 (文坛精英)

【答案】应助回帖

样品中的蛋白量太高会把marker挤成这样。
7楼2014-07-14 14:25:02
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xuyunjian

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

电泳条带歪斜,一般是因为:
1.您的凝胶制备不均匀,您不用太担心凝固,只要不早加引发剂就行,制胶时,加入药品后要用枪吹打,注意不要出现气泡。
2.插梳子时要平稳,不用太担心,胶不会一瞬间就凝,慢慢来
3.其次,您在制版时可能操作不当,导致胶面与板面出现气泡,您加胶时,在一处加入就行,不用来回走动枪。加水时,勿在一处加,尽量多加些水,这样分离胶与浓缩胶的面就较平整。
4.凝胶制备时可能没有在凝胶未聚合前保持水平或静止,导致凝胶厚度不一致。
5、你可以对制胶时用的药品,进行超声除气泡,交联剂、引发剂就不用了,因为用量少
6、建议您看看一些国外实验视频,这在优酷、爱奇艺,以及生物帮上都有
相信自己,永不言弃
8楼2014-07-14 22:59:12
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protein780

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

还有可能是的跑胶的过程漏液了,或者靠近marker的泳道蛋白浓度太高了。
9楼2014-07-24 13:01:29
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spiderboy

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

呵呵,楼主的情况,我前天刚碰到过。楼上说的都有道理,不过我认为我的情况都不是楼上说的情况。我开始也以为是主要是胶制作的问题。但是,因为我的两块胶是面对面一起跑电泳的,跑的时候溴酚蓝却是在同一侧倾斜,所以胶应该没问题。
     这个情况明显是一边电流大,一边电流小。所以明显是电泳液或者电泳装备等的某个因素出了问题,导致这个情况。后来重新清洗了遍装备,电极什么的也换了下接口,就好了。感觉这个现象很偶然。因为之前设备都没啥问题。
10楼2014-07-24 15:03:19
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