24小时热门版块排行榜    

查看: 2152  |  回复: 7

xiaoyu0127

铜虫 (小有名气)

[求助] 纯化 蛋白降解? 已有5人参与

第一天用抗原抗体亲和层析,纯化得到的浓度虽然不高,但是western-blot能检测到。接下来反复过柱子,大概一个星期,将得到的蛋白溶液透析浓缩,可是western竟然检测不到了。很奇怪,难道是蛋白浓度低且在4度放了一个星期,蛋白降解了。浓缩条件是聚乙二醇20000,透析是4度PBS,个人认为也不会有问题,疑惑,求指点。
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

pennchem

专家顾问 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
4度下蛋白过一个星期,而且浓度不高,被降解的可能性太大了。

水解酶无处不在,虽然你看不见它,可是它会不停的降解你的蛋白。

纯化后,尽快浓缩,加上甘油,分装后,-20度,或者-80度保存。
行至水穷处,坐看云起时
2楼2014-06-25 21:40:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xiaoyu0127

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by pennchem at 2014-06-25 21:40:11
4度下蛋白过一个星期,而且浓度不高,被降解的可能性太大了。

水解酶无处不在,虽然你看不见它,可是它会不停的降解你的蛋白。

纯化后,尽快浓缩,加上甘油,分装后,-20度,或者-80度保存。

不过我一个星期纯化好后,测了一下总吸光度,还是在正常范围的。我的透析和浓缩有可能会导致蛋白不见吗?另外,我后续要做结合实验,不加甘油,直接分装-80保存也行吧
3楼2014-06-26 10:04:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

树在田野

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
请问peg20000透析能去除么,不是还残留么

[ 发自小木虫客户端 ]
好好学习
4楼2014-06-26 15:05:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
不同的蛋白质性质也不同,但是我纯化过4个野生蛋白质,都是在4度下放半年,活力无损失。估计是纯化过程中损失大,或者是选择透析袋的直径太大。
流星来时我许了个愿,愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具,久不看论坛一来就提问者,宁弃EPI和VIP也不回帖。
5楼2014-06-26 20:24:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

elise1987

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
透析前后取样检测一下先。实验过程中最好分步留样,将来出问题好分析原因。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
不折腾,不胡闹,珍惜时间和生命
6楼2014-06-26 23:08:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xiaoyu0127

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
5楼: Originally posted by 冼亮淀粉酶 at 2014-06-26 20:24:40
不同的蛋白质性质也不同,但是我纯化过4个野生蛋白质,都是在4度下放半年,活力无损失。估计是纯化过程中损失大,或者是选择透析袋的直径太大。

孔径12k,目的蛋白170k,透析袋没有问题,不过我的蛋白浓度低,倒是很可能透析损耗。

[ 发自小木虫客户端 ]
7楼2014-06-27 11:11:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

环境增值联盟

铁虫 (小有名气)

感谢参与,应助指数 +1
silicare: 屏蔽内容, 无关信息 2014-06-28 08:07:39
本帖内容被屏蔽

8楼2014-06-27 11:22:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 xiaoyu0127 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] filecode与中标关系的预测 +5 布布和一二 2026-08-07 5/250 2026-08-09 16:15 by 袁向阳007
[基金申请] 关于filecode,很负责任的告诉大家 +6 爱看书的可乐 2026-08-08 7/350 2026-08-08 22:13 by a_niu
[考博] 【2027博士申请】纳米药物递送方向 20+3 13586093586 2026-08-03 5/250 2026-08-08 21:54 by 13586093586
[基金申请] 2026国自然放榜时间 +3 布布和一二 2026-08-08 3/150 2026-08-08 18:15 by Lightingo
[基金申请] 国基金的申报应该改成非等额制,评价高的钱多评价低的钱少,但是增加资助率 +7 a089 2026-08-07 7/350 2026-08-08 18:05 by gltch
[公派出国] 售SCI文章,我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 qTvzQBRAHjCi 2026-08-07 4/200 2026-08-08 17:27 by oEVWOejN9taj
[考博] 售一区SCI文章T0P,我:8O.551.O54,科目全,可十急 +3 Vi50GxzrFcSG 2026-08-07 4/200 2026-08-08 16:22 by oEVWOejN9taj
[公派出国] 售SCI一区T0P文章,我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 Vi50GxzrFcSG 2026-08-07 5/250 2026-08-08 15:59 by oEVWOejN9taj
[硕博家园] 售SCI一区文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +4 HEQlVqMTIA7d 2026-08-07 6/300 2026-08-08 14:47 by oEVWOejN9taj
[博后之家] 售SCI一区T0P文章,我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +3 HEQlVqMTIA7d 2026-08-07 6/300 2026-08-08 14:42 by oEVWOejN9taj
[公派出国] 售SCI文章,我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 HEQlVqMTIA7d 2026-08-07 6/300 2026-08-08 14:39 by oEVWOejN9taj
[论文投稿] 售SCI一区T0P文章,我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 HEQlVqMTIA7d 2026-08-07 5/250 2026-08-08 14:22 by oEVWOejN9taj
[教师之家] 售SCI一区文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 KXLV3nuBVBY7 2026-08-07 5/250 2026-08-08 14:07 by oEVWOejN9taj
[论文投稿] 售SCI文章,我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +3 KXLV3nuBVBY7 2026-08-07 6/300 2026-08-08 14:01 by oEVWOejN9taj
[硕博家园] 售SCI-T0P文章,我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 Vi50GxzrFcSG 2026-08-07 6/300 2026-08-08 10:19 by 3OOjAIS77qg2
[考博] 售SCI一区文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 HEQlVqMTIA7d 2026-08-07 3/150 2026-08-08 03:47 by 6vVgjDL4CnGu
[基金申请] 基金中了 +14 laoda193707 2026-08-06 14/700 2026-08-08 00:23 by 实验小白ha
[基金申请] 关于filecode +4 布布和一二 2026-08-07 7/350 2026-08-07 22:55 by zhanghaozhu
[基金申请] 8月时间戳变的,举个手。玩一下,释放压力 +9 archvillain 2026-08-04 11/550 2026-08-05 20:06 by wlwhappy
[基金申请] 好消息?这个有何含义??? +8 Tide man 2026-08-05 10/500 2026-08-05 16:14 by xmuxiaoyu
信息提示
请填处理意见