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xiaoyu0127

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[求助] 纯化蛋白降解？已有5人参与

第一天用抗原抗体亲和层析，纯化得到的浓度虽然不高，但是western-blot能检测到。接下来反复过柱子，大概一个星期，将得到的蛋白溶液透析浓缩，可是western竟然检测不到了。很奇怪，难道是蛋白浓度低且在4度放了一个星期，蛋白降解了。浓缩条件是聚乙二醇20000，透析是4度PBS,个人认为也不会有问题，疑惑，求指点。

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1楼 2014-06-25 20:50:45

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pennchem

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【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1

4度下蛋白过一个星期，而且浓度不高，被降解的可能性太大了。

水解酶无处不在，虽然你看不见它，可是它会不停的降解你的蛋白。

纯化后，尽快浓缩，加上甘油，分装后，-20度，或者-80度保存。

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行至水穷处，坐看云起时

2楼2014-06-25 21:40:11

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xiaoyu0127

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引用回帖:

2楼: Originally posted by pennchem at 2014-06-25 21:40:11
4度下蛋白过一个星期，而且浓度不高，被降解的可能性太大了。

水解酶无处不在，虽然你看不见它，可是它会不停的降解你的蛋白。

纯化后，尽快浓缩，加上甘油，分装后，-20度，或者-80度保存。

不过我一个星期纯化好后，测了一下总吸光度，还是在正常范围的。我的透析和浓缩有可能会导致蛋白不见吗？另外，我后续要做结合实验，不加甘油，直接分装-80保存也行吧

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3楼2014-06-26 10:04:52

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