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xiaoyu0127

铜虫 (小有名气)

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注册: 2012-12-07
性别: MM
专业: 生物化学

[求助] 纯化蛋白降解？已有5人参与

第一天用抗原抗体亲和层析，纯化得到的浓度虽然不高，但是western-blot能检测到。接下来反复过柱子，大概一个星期，将得到的蛋白溶液透析浓缩，可是western竟然检测不到了。很奇怪，难道是蛋白浓度低且在4度放了一个星期，蛋白降解了。浓缩条件是聚乙二醇20000，透析是4度PBS,个人认为也不会有问题，疑惑，求指点。

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1楼 2014-06-25 20:50:45

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pennchem

专家顾问 (正式写手)

专家经验: +21
BioEPI: 5
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红花: 28
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注册: 2012-11-21
专业: 生物大分子结构与功能
管辖: 生物科学

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1

4度下蛋白过一个星期，而且浓度不高，被降解的可能性太大了。

水解酶无处不在，虽然你看不见它，可是它会不停的降解你的蛋白。

纯化后，尽快浓缩，加上甘油，分装后，-20度，或者-80度保存。

行至水穷处，坐看云起时

2楼2014-06-25 21:40:11

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