24小时热门版块排行榜    

查看: 1923  |  回复: 7
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

xiaoyu0127

铜虫 (小有名气)

[求助] 纯化 蛋白降解? 已有5人参与

第一天用抗原抗体亲和层析,纯化得到的浓度虽然不高,但是western-blot能检测到。接下来反复过柱子,大概一个星期,将得到的蛋白溶液透析浓缩,可是western竟然检测不到了。很奇怪,难道是蛋白浓度低且在4度放了一个星期,蛋白降解了。浓缩条件是聚乙二醇20000,透析是4度PBS,个人认为也不会有问题,疑惑,求指点。
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

树在田野

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
请问peg20000透析能去除么,不是还残留么

[ 发自小木虫客户端 ]
好好学习
4楼2014-06-26 15:05:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 8 个回答

pennchem

专家顾问 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
4度下蛋白过一个星期,而且浓度不高,被降解的可能性太大了。

水解酶无处不在,虽然你看不见它,可是它会不停的降解你的蛋白。

纯化后,尽快浓缩,加上甘油,分装后,-20度,或者-80度保存。
行至水穷处,坐看云起时
2楼2014-06-25 21:40:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xiaoyu0127

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by pennchem at 2014-06-25 21:40:11
4度下蛋白过一个星期,而且浓度不高,被降解的可能性太大了。

水解酶无处不在,虽然你看不见它,可是它会不停的降解你的蛋白。

纯化后,尽快浓缩,加上甘油,分装后,-20度,或者-80度保存。

不过我一个星期纯化好后,测了一下总吸光度,还是在正常范围的。我的透析和浓缩有可能会导致蛋白不见吗?另外,我后续要做结合实验,不加甘油,直接分装-80保存也行吧
3楼2014-06-26 10:04:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
不同的蛋白质性质也不同,但是我纯化过4个野生蛋白质,都是在4度下放半年,活力无损失。估计是纯化过程中损失大,或者是选择透析袋的直径太大。
流星来时我许了个愿,愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具,久不看论坛一来就提问者,宁弃EPI和VIP也不回帖。
5楼2014-06-26 20:24:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 0703化学调剂 +8 妮妮ninicgb 2026-03-15 12/600 2026-03-19 05:55 by anny19840123
[考研] 321求调剂 +3 何润采123 2026-03-18 3/150 2026-03-18 21:27 by li123456789.
[考研] 26调剂/材料/英一数二/总分289/已过A区线 +7 步川酷紫123 2026-03-13 7/350 2026-03-18 17:12 by 尽舜尧1
[考研] 收复试调剂生 +4 雨后秋荷 2026-03-18 4/200 2026-03-18 14:16 by elevennnne
[考研] 0854,计算机类招收调剂 +3 胡辣汤放糖 2026-03-15 6/300 2026-03-18 12:09 by 上岸上岸……..
[考研] 280求调剂 +6 咕噜晓晓 2026-03-18 7/350 2026-03-18 11:25 by 无际的草原
[考研] 303求调剂 +4 睿08 2026-03-17 6/300 2026-03-18 11:01 by Iveryant
[考博] 26博士申请 +3 1042136743 2026-03-17 3/150 2026-03-17 23:30 by 轻松不少随
[考研] 材料专硕326求调剂 +6 墨煜姒莘 2026-03-15 7/350 2026-03-17 17:10 by ruiyingmiao
[考研] 290求调剂 +3 p asserby. 2026-03-15 4/200 2026-03-17 16:35 by wangkm
[考研] 290求调剂 +6 孔志浩 2026-03-12 11/550 2026-03-17 14:41 by 周舟舟77
[考研] 277材料科学与工程080500求调剂 +3 自由煎饼果子 2026-03-16 3/150 2026-03-16 14:10 by 运气yunqi
[考研] 26考研一志愿中国石油大学(华东)305分求调剂 +3 嘉年新程 2026-03-15 3/150 2026-03-15 13:58 by 哈哈哈哈嘿嘿嘿
[考研] 中科大材料专硕319求调剂 +3 孟鑫材料 2026-03-13 3/150 2026-03-14 18:10 by houyaoxu
[考研] 311求调剂 +3 冬十三 2026-03-13 3/150 2026-03-13 20:41 by JourneyLucky
[考研] 307求调剂 +5 超级伊昂大王 2026-03-12 5/250 2026-03-13 15:56 by 棒棒球手
[考研] 一志愿211化学学硕310分求调剂 +8 努力奋斗112 2026-03-12 9/450 2026-03-13 15:41 by JourneyLucky
[考研] 求调剂 +3 程雨杭 2026-03-12 3/150 2026-03-13 15:06 by JourneyLucky
[考研] 289求调剂 +3 李政莹 2026-03-12 3/150 2026-03-13 11:02 by 求调剂zz
[考研] 081200-11408-276学硕求调剂 +3 崔wj 2026-03-12 4/200 2026-03-12 19:33 by 求调剂zz
信息提示
请填处理意见