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aofeng860308

木虫 (正式写手)

[求助] GST纯化,洗脱时不出峰,检测有蛋白。 已有3人参与

如题,纯化一个带GST标签的蛋白,裂解Buffer和平衡Buffer为PBS+5%Triton x-100,洗脱Buffer为50mM Tris-Hcl+10mM 还原型谷胱甘肽。洗脱时,不但不出峰,峰值反倒出现负值,而且负得很多,-2000mAU左右。将收集的样品进行SDS-PAGE,发现洗脱中有目的蛋白,只是量不多。
想请教一下大神们,为什么会不出峰,反而会出现负值,之前纯化过的都是正常的。
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wolfman840

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
youlinglyw: 金币+2, 赠人玫瑰手有余香,生物科学有你更精彩! 2014-07-03 15:10:37
你的紫外吸收池是否定期用氢氧化钠或者稀盐酸清洗过?里面的氘灯是不是到寿命了要换了?偏光片或者光栅是不是要更换或校准?如果以前一直都好,没有预兆的出现持续异常情况,需要检查一下你的设备。
5楼2014-07-03 13:30:25
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Davie_Meagen

新虫 (初入文坛)

纯属意外,检测器里可能有气泡导致的,很正常。
2楼2014-06-17 15:57:47
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aofeng860308

木虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by Davie_Meagen at 2014-06-17 15:57:47
纯属意外,检测器里可能有气泡导致的,很正常。

不是气泡,最近做了几次都是出现这样。
3楼2014-06-17 16:59:57
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lihuan0525

金虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
建议楼主收集后,做紫外检测。也可能是你仪器上的检测器有问题呢,这样对比一下就知道了,
4楼2014-06-17 21:03:44
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