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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 专业学科区 » 食品 » 实验室分析、仪器 » 层析柱分离纯化，懂得亲们来帮帮忙啊
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李畅0527

铁虫 (初入文坛)

[求助] 层析柱分离纯化，懂得亲们来帮帮忙啊 已有7人参与

我将蛋白水解后应该有很多不同分子量的肽，经分子筛分离应该有很多峰，可是为什么只出了一个穿透峰呢，明白的请帮我分析一下。我用的填料是葡聚糖凝胶G25，柱子是1.6*40cm的。上样浓度是50mg/ml，不出峰是不是跟浓度有关系啊？
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1楼 2014-04-19 16:14:05
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

飘渺尘埃

木虫 (小有名气)
我最近也在做这方面的东西，根据你的情况说点我的观点，希望对你有用。首先个人觉得你的样品浓度有点高，本人也做过50mg/mL的浓度，分离效果很不好，25就很好，大部分博士硕士论文的浓度也是25；第二，您的问题中没有提到流速，流速是影响分离效果的主 要因素，根据文献和我自己做实验的情况，我觉得0.5mL/min是比较合适的。第三，如其他人所说，你的柱子高度确实不高，柱子高度有点低。第四，还有可能就是你的多肽的分子量不在g25的分离范围内，你可以先做一下分子量分布，然后选择合适的凝胶。第五，你的收集管的体积要尽量小，这样你分开的峰才不会因收集量大而又混合在一起。希望对你有用。
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成功需要的条件很多，你我只需在一个条件下努力前行
14楼2014-04-23 09:47:24
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ywlzwd

铁杆木虫 (著名写手)
引用回帖:
18楼: Originally posted by 李畅0527 at 2014-04-25 11:03:56
恩恩，谢谢，挺有用的，我再做下试试。请问你会用蛋白质纯化仪么？...

不好意思，蛋白质纯化仪不会用。
纯化蛋白还可以考虑先粗提，再使用分子筛与离子交换交替使用，拿到的蛋白纯度还是很高的。不过过柱子，确实很耗神啊！楼主加油。
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静下来，沉下去，将学到更多！
21楼2014-04-26 01:06:04
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普通回帖

冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶
你应该可以画一条曲线，横轴是收集管，纵轴是A280.
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流星来时我许了个愿，愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具，久不看论坛一来就提问者，宁弃EPI和VIP也不回帖。
2楼2014-04-19 23:14:09
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1034181008

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
1、有可能还没分开呢，这么短的柱子，要是你自己填充的，柱效应该没那么高。2、浓度可能太低，检测不出。个人拙见，你再试试。
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3楼2014-04-19 23:22:30
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//安生

金虫 (知名作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
换个长些的柱子吧，个人认为与柱子长度有关，本人正在进行这方面的纯化实验，80cm的柱子，装了将近次柱子，只有1次最满意，，，不是人为可以控制的啊，努力装的一样，可峰型还是还是有差异的加油
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日久不一定生情，但必定见人心。
4楼2014-04-22 08:44:06
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zhaoyingqing

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
我感觉 不应该是柱子的问题， 有可能是浓度的问题，另外一个就是你样品处理 可能就是一个峰，要不你可以做一下粗分离
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有你的生活会更美好！
5楼2014-04-22 15:19:30
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李畅0527

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 冼亮淀粉酶 at 2014-04-19 23:14:09
你应该可以画一条曲线，横轴是收集管，纵轴是A280.

是，横轴是收集管，纵轴是A280，蛋白纯化仪上自动显示的，可是没有峰。
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6楼2014-04-22 15:39:59
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李畅0527

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 1034181008 at 2014-04-19 23:22:30
1、有可能还没分开呢，这么短的柱子，要是你自己填充的，柱效应该没那么高。2、浓度可能太低，检测不出。个人拙见，你再试试。

恩，第一个有可能，柱子是有点短。关于浓度，如果浓度太高了，粘度大了会不会也不好分离啊，我之前做过一次是100mg/ml的，也没出峰。
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7楼2014-04-22 15:42:19
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李畅0527

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by //安生 at 2014-04-22 08:44:06
换个长些的柱子吧，个人认为与柱子长度有关，本人正在进行这方面的纯化实验，80cm的柱子，装了将近次柱子，只有1次最满意，，，不是人为可以控制的啊，努力装的一样，可峰型还是还是有差异的加油

你也是分子筛的么？就是根据分子量不同先后洗出。如果真是柱子太短没分离开，不是应该有一个大分子的峰么，可是我的怎么一个都没出。请问你上样的浓度是多少啊？
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8楼2014-04-22 15:45:42
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李畅0527

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by zhaoyingqing at 2014-04-22 15:19:30
我感觉 不应该是柱子的问题， 有可能是浓度的问题，另外一个就是你样品处理 可能就是一个峰，要不你可以做一下粗分离

我的样品是蛋白质水解物，应该是很多不同分子量的多肽，不可能就一个峰啊，凝胶色谱就是我的粗分，还有什么办法能检测一下我的样品组成么？
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9楼2014-04-22 15:50:35
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//安生

金虫 (知名作家)
引用回帖:
8楼: Originally posted by 李畅0527 at 2014-04-22 15:45:42
你也是分子筛的么？就是根据分子量不同先后洗出。如果真是柱子太短没分离开，不是应该有一个大分子的峰么，可是我的怎么一个都没出。请问你上样的浓度是多少啊？...

50mg/ml，100mg/ml，浓度大小感觉只影响峰的高低啊，，，你样品分子量多大？
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日久不一定生情，但必定见人心。
10楼2014-04-22 19:16:29
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