应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 专业学科区 » 食品 » 实验室分析、仪器 » 层析柱分离纯化，懂得亲们来帮帮忙啊
281/3返回列表123下一页
查看: 2824  |  回复: 27
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

李畅0527

铁虫 (初入文坛)

[求助] 层析柱分离纯化，懂得亲们来帮帮忙啊 已有7人参与

我将蛋白水解后应该有很多不同分子量的肽，经分子筛分离应该有很多峰，可是为什么只出了一个穿透峰呢，明白的请帮我分析一下。我用的填料是葡聚糖凝胶G25，柱子是1.6*40cm的。上样浓度是50mg/ml，不出峰是不是跟浓度有关系啊？
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2014-04-19 16:14:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

飘渺尘埃

木虫 (小有名气)
我最近也在做这方面的东西，根据你的情况说点我的观点，希望对你有用。首先个人觉得你的样品浓度有点高，本人也做过50mg/mL的浓度，分离效果很不好，25就很好，大部分博士硕士论文的浓度也是25；第二，您的问题中没有提到流速，流速是影响分离效果的主 要因素，根据文献和我自己做实验的情况，我觉得0.5mL/min是比较合适的。第三，如其他人所说，你的柱子高度确实不高，柱子高度有点低。第四，还有可能就是你的多肽的分子量不在g25的分离范围内，你可以先做一下分子量分布，然后选择合适的凝胶。第五，你的收集管的体积要尽量小，这样你分开的峰才不会因收集量大而又混合在一起。希望对你有用。
赞一下(2人) 回复此楼
成功需要的条件很多，你我只需在一个条件下努力前行
14楼2014-04-23 09:47:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ywlzwd

铁杆木虫 (著名写手)
引用回帖:
18楼: Originally posted by 李畅0527 at 2014-04-25 11:03:56
恩恩，谢谢，挺有用的，我再做下试试。请问你会用蛋白质纯化仪么？...

不好意思，蛋白质纯化仪不会用。
纯化蛋白还可以考虑先粗提，再使用分子筛与离子交换交替使用，拿到的蛋白纯度还是很高的。不过过柱子，确实很耗神啊！楼主加油。
赞一下(1人) 回复此楼
静下来，沉下去，将学到更多！
21楼2014-04-26 01:06:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶
你应该可以画一条曲线，横轴是收集管，纵轴是A280.
赞一下 回复此楼
流星来时我许了个愿，愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具，久不看论坛一来就提问者，宁弃EPI和VIP也不回帖。
2楼2014-04-19 23:14:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

1034181008

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
1、有可能还没分开呢，这么短的柱子，要是你自己填充的，柱效应该没那么高。2、浓度可能太低，检测不出。个人拙见，你再试试。
赞一下 回复此楼
3楼2014-04-19 23:22:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

//安生

金虫 (知名作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
换个长些的柱子吧，个人认为与柱子长度有关，本人正在进行这方面的纯化实验，80cm的柱子，装了将近次柱子，只有1次最满意，，，不是人为可以控制的啊，努力装的一样，可峰型还是还是有差异的加油
赞一下 回复此楼
日久不一定生情，但必定见人心。
4楼2014-04-22 08:44:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhaoyingqing

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
我感觉 不应该是柱子的问题， 有可能是浓度的问题，另外一个就是你样品处理 可能就是一个峰，要不你可以做一下粗分离
赞一下 回复此楼
有你的生活会更美好！
5楼2014-04-22 15:19:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

李畅0527

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 冼亮淀粉酶 at 2014-04-19 23:14:09
你应该可以画一条曲线，横轴是收集管，纵轴是A280.

是，横轴是收集管，纵轴是A280，蛋白纯化仪上自动显示的，可是没有峰。
赞一下 回复此楼
6楼2014-04-22 15:39:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

李畅0527

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 1034181008 at 2014-04-19 23:22:30
1、有可能还没分开呢，这么短的柱子，要是你自己填充的，柱效应该没那么高。2、浓度可能太低，检测不出。个人拙见，你再试试。

恩，第一个有可能，柱子是有点短。关于浓度，如果浓度太高了，粘度大了会不会也不好分离啊，我之前做过一次是100mg/ml的，也没出峰。
赞一下 回复此楼
7楼2014-04-22 15:42:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

李畅0527

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by //安生 at 2014-04-22 08:44:06
换个长些的柱子吧，个人认为与柱子长度有关，本人正在进行这方面的纯化实验，80cm的柱子，装了将近次柱子，只有1次最满意，，，不是人为可以控制的啊，努力装的一样，可峰型还是还是有差异的加油

你也是分子筛的么？就是根据分子量不同先后洗出。如果真是柱子太短没分离开，不是应该有一个大分子的峰么，可是我的怎么一个都没出。请问你上样的浓度是多少啊？
赞一下 回复此楼
8楼2014-04-22 15:45:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

李畅0527

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by zhaoyingqing at 2014-04-22 15:19:30
我感觉 不应该是柱子的问题， 有可能是浓度的问题，另外一个就是你样品处理 可能就是一个峰，要不你可以做一下粗分离

我的样品是蛋白质水解物，应该是很多不同分子量的多肽，不可能就一个峰啊，凝胶色谱就是我的粗分，还有什么办法能检测一下我的样品组成么？
赞一下 回复此楼
9楼2014-04-22 15:50:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

//安生

金虫 (知名作家)
引用回帖:
8楼: Originally posted by 李畅0527 at 2014-04-22 15:45:42
你也是分子筛的么？就是根据分子量不同先后洗出。如果真是柱子太短没分离开，不是应该有一个大分子的峰么，可是我的怎么一个都没出。请问你上样的浓度是多少啊？...

50mg/ml，100mg/ml，浓度大小感觉只影响峰的高低啊，，，你样品分子量多大？
赞一下 回复此楼
日久不一定生情，但必定见人心。
10楼2014-04-22 19:16:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 李畅0527 的主题更新
281/3返回列表123下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 化工270求调剂 +8 什么名字qwq 2026-03-02 8/400 2026-03-02 13:03 by houyaoxu
[考研] 一志愿山东大学材料与化工325求调剂 +3 半截的诗0927 2026-03-02 3/150 2026-03-02 12:58 by houyaoxu
[基金申请] 面上模板改不了页边距吧？ +6 ieewxg 2026-02-25 7/350 2026-03-02 12:44 by stidwellNK
[考研] 考研复试调剂，过国家线的同学都可报名 +3 黑！在干嘛 2026-02-28 4/200 2026-03-02 12:20 by 花鱼不是鱼
[考研] 265分求调剂不调专业和学校有行学上就 +6 礼堂丁真258 2026-02-28 9/450 2026-03-02 12:04 by 52hz~~
[考研] 材料工程专硕283求调剂 5+4 ，！？ 2026-03-02 6/300 2026-03-02 11:07 by 黑！在干嘛
[考研] 0856材料与化工，270求调剂 +8 YXCT 2026-03-01 9/450 2026-03-02 11:01 by 无际的草原
[考研] 275求调剂 +3 L-xin? 2026-03-01 6/300 2026-03-02 10:22 by 热情沙漠
[考研] 高分子化学与物理调剂 +6 好好好1233 2026-02-28 13/650 2026-03-02 07:27 by 好好好1233
[考研] 0857调剂 +4 一ll半 2026-02-28 5/250 2026-03-02 02:33 by 908055542
[基金申请] 成果系统访问量大，请一小时后再尝试。---NSFC啥时候好哦，已经两天这样了 +4 NSFC2026我来了 2026-02-28 4/200 2026-03-01 22:37 by 铁门栓
[硕博家园] 博士自荐 +7 科研狗111 2026-02-26 11/550 2026-03-01 22:24 by 哲平L
[考研] 299求调剂 +3 Y墨明棋妙Y 2026-02-28 5/250 2026-03-01 21:01 by tangxiaotian
[考研] 291分工科求调剂 +9 science饿饿 2026-03-01 10/500 2026-03-01 18:55 by 18137688336
[考研] 285求调剂 +8 满头大汗的学生 2026-02-28 8/400 2026-03-01 16:47 by caszguilin
[考研] 求调剂 +6 repeatt?t 2026-02-28 6/300 2026-03-01 14:37 by Sakura绘
[考研] 课题组接收材料类调剂研究生 +3 gaoxiaoniuma 2026-02-28 4/200 2026-03-01 14:30 by jjj三跨
[论文投稿] 求助coordination chemistry reviews 的写作模板 10+3 ljplijiapeng 2026-02-27 4/200 2026-03-01 09:07 by babero
[论文投稿] Optics letters投稿被拒求助 30+3 luckyry 2026-02-26 4/200 2026-03-01 09:06 by babero
[考研] 085600材料工程一志愿中科大总分312求调剂 +8 吃宵夜1 2026-02-28 10/500 2026-02-28 20:27 by L135790
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭