应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 专业学科区 » 食品 » 实验室分析、仪器 » 层析柱分离纯化，懂得亲们来帮帮忙啊
282/3返回列表上一页123下一页
查看: 3238  |  回复: 27
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

ywlzwd

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
李畅0527: 金币+3, ★★★很有帮助 2014-04-27 19:31:36
第一，是不是柱床不稳定，上的样品根本就没有进分子筛，而是直接边流造成的？所以只有一个峰。第二，就是洗脱时速度的控制，不应该太快，经验值应该是每分钟20滴的样子？第三，洗脱液中盐离子的浓度不应该太低，否则小分子肽是会吸附的不会洗出来（虽然是分子筛，但是吸附效应不应该忽视）？仅供参考！
赞一下 回复此楼
静下来，沉下去，将学到更多！
11楼2014-04-22 20:14:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

1034181008

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
9楼: Originally posted by 李畅0527 at 2014-04-22 15:50:35
我的样品是蛋白质水解物，应该是很多不同分子量的多肽，不可能就一个峰啊，凝胶色谱就是我的粗分，还有什么办法能检测一下我的样品组成么？...

就是组分太多了，而水解后样品的浓度又相对降低了很多，柱效又低，所以出现分不开的现象很正常。是否可以按分子量再粗分，然后再上柱粗分呢？一般这种直接水解的样品，然后上这么短的柱子，是没什么效果的
赞一下 回复此楼
12楼2014-04-22 22:42:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶
能不能上图？
回复此楼
流星来时我许了个愿，愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具，久不看论坛一来就提问者，宁弃EPI和VIP也不回帖。
13楼2014-04-23 01:16:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

飘渺尘埃

木虫 (小有名气)
我最近也在做这方面的东西，根据你的情况说点我的观点，希望对你有用。首先个人觉得你的样品浓度有点高，本人也做过50mg/mL的浓度，分离效果很不好，25就很好，大部分博士硕士论文的浓度也是25；第二，您的问题中没有提到流速，流速是影响分离效果的主 要因素，根据文献和我自己做实验的情况，我觉得0.5mL/min是比较合适的。第三，如其他人所说，你的柱子高度确实不高，柱子高度有点低。第四，还有可能就是你的多肽的分子量不在g25的分离范围内，你可以先做一下分子量分布，然后选择合适的凝胶。第五，你的收集管的体积要尽量小，这样你分开的峰才不会因收集量大而又混合在一起。希望对你有用。
赞一下(2人) 回复此楼
成功需要的条件很多，你我只需在一个条件下努力前行
14楼2014-04-23 09:47:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lim1896

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

水解后的肽大概是多少的分子量，如果太大或者接近，不好分离出来，而且，浓度不要太高，太高的话就过载了，哗啦一下跟流动相一样全出来了，再或者你多等几个柱体积，也许会有其他峰出现
赞一下 回复此楼
15楼2014-04-24 17:16:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

李畅0527

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
10楼: Originally posted by //安生 at 2014-04-22 19:16:29
50mg/ml，100mg/ml，浓度大小感觉只影响峰的高低啊，，，你样品分子量多大？...

我也不知道，就是乳铁蛋白水解物，应该1000到8000范围挺广的。可能是柱子没装好吧。对了，请问你会用蛋白质纯化仪么？那什么AKTA。
赞一下 回复此楼
16楼2014-04-25 10:45:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

李畅0527

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
11楼: Originally posted by ywlzwd at 2014-04-22 20:14:16
第一，是不是柱床不稳定，上的样品根本就没有进分子筛，而是直接边流造成的？所以只有一个峰。第二，就是洗脱时速度的控制，不应该太快，经验值应该是每分钟20滴的样子？第三，洗脱液中盐离子的浓度不应该太低，否则 ...

恩，我流速设的是1ml/min，20滴是0.8ml，差不多，第一点和第三点我确实应该再好好考虑下。谢谢。对了，请问你会用蛋白质纯化仪么？
赞一下 回复此楼
17楼2014-04-25 10:59:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

李畅0527

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
14楼: Originally posted by 飘渺尘埃 at 2014-04-23 09:47:24
我最近也在做这方面的东西，根据你的情况说点我的观点，希望对你有用。首先个人觉得你的样品浓度有点高，本人也做过50mg/mL的浓度，分离效果很不好，25就很好，大部分博士硕士论文的浓度也是25；第二，您的问题中没 ...

恩恩，谢谢，挺有用的，我再做下试试。请问你会用蛋白质纯化仪么？
赞一下 回复此楼
18楼2014-04-25 11:03:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

liuzhenhai

铁杆木虫 (正式写手)
多大的晒。

[ 发自小木虫客户端 ]
回复此楼
19楼2014-04-25 11:35:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

李畅0527

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
19楼: Originally posted by liuzhenhai at 2014-04-25 11:35:16
多大的晒。

筛？葡聚糖G25的胶，分离5000以下的。
赞一下 回复此楼
20楼2014-04-25 12:22:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 李畅0527 的主题更新
282/3返回列表上一页123下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 明天应该可查了！？ +4 chengyan1220 2026-08-23 4/200 2026-08-24 08:47 by gloomy6159
[基金申请] 能否退出参与的面上项目解除限项 +6 koalala 2026-08-24 6/300 2026-08-24 08:21 by 正能量1斤
[基金申请] 什么时候开奖？ +10 CrisMessi 2026-08-18 11/550 2026-08-24 06:50 by 开心的小狮子
[基金申请] 建议基金发布提前给出明确的时间点 +11 kulium 2026-08-21 14/700 2026-08-24 02:12 by 流流伤
[基金申请] 让我中一个面上吧！ +12 大萍1987 2026-08-20 15/750 2026-08-23 20:44 by 大萍1987
[基金申请] 2026年的国家社科基金项目通讯评审的新规则与新动向、新挑战 +4 process2012 2026-08-23 5/250 2026-08-23 19:58 by jurkat.1640
[教师之家] 跳槽后在研项目怎么办？ +5 简单化xn 2026-08-22 10/500 2026-08-23 12:38 by 简单化xn
[基金申请] 今天放榜吗？ +15 布布和一二 2026-08-19 16/800 2026-08-23 09:55 by 张春生
[基金申请] 今天基金会出结果吗？20260819 +16 kkkl_v 2026-08-19 17/850 2026-08-22 16:12 by 阿布Abu
[基金申请] 时间戳今天，20号变了 +5 archvillain 2026-08-20 5/250 2026-08-22 06:12 by hui_daxiao
[基金申请] 放榜前的不淡定 40+4 snowwithsea 2026-08-19 14/700 2026-08-21 23:51 by cratir
[基金申请] 科研孤儿太难了 +17 我4大白菜 2026-08-20 18/900 2026-08-21 20:57 by zhangev
[基金申请] 时间戳又变了 +13 wuchongjun 2026-08-20 19/950 2026-08-21 17:21 by 紫杉醇
[基金申请] 感觉是下周放榜了 +7 angus9576 2026-08-17 12/600 2026-08-21 13:38 by weiyin
[基金申请] 我面上完蛋了 +7 且听虎啸 2026-08-20 8/400 2026-08-21 12:31 by 酷酷墨镜
[基金申请] 应该是下周三26日公布了吧？ +4 哈哈蛤？ 2026-08-21 4/200 2026-08-21 10:58 by Vivilian
[论文投稿] 投稿咨询 +5 wwm09 2026-08-17 7/350 2026-08-21 10:11 by 期刊论文帮手
[基金申请] 估计是周四 +3 archvillain 2026-08-18 3/150 2026-08-21 01:48 by jnhyjjm
[基金申请] 时间戳变了，能看出什么问题？ +18 基诺咪客 2026-08-17 23/1150 2026-08-20 17:19 by Godzela
[基金申请] 重要消息，中午系统在维护 +11 yuleib84 2026-08-18 12/600 2026-08-20 11:09 by xskun
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭