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ywlzwd

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
李畅0527: 金币+3, ★★★很有帮助 2014-04-27 19:31:36
第一，是不是柱床不稳定，上的样品根本就没有进分子筛，而是直接边流造成的？所以只有一个峰。第二，就是洗脱时速度的控制，不应该太快，经验值应该是每分钟20滴的样子？第三，洗脱液中盐离子的浓度不应该太低，否则小分子肽是会吸附的不会洗出来（虽然是分子筛，但是吸附效应不应该忽视）？仅供参考！
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静下来，沉下去，将学到更多！
11楼2014-04-22 20:14:16
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1034181008

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
9楼: Originally posted by 李畅0527 at 2014-04-22 15:50:35
我的样品是蛋白质水解物，应该是很多不同分子量的多肽，不可能就一个峰啊，凝胶色谱就是我的粗分，还有什么办法能检测一下我的样品组成么？...

就是组分太多了，而水解后样品的浓度又相对降低了很多，柱效又低，所以出现分不开的现象很正常。是否可以按分子量再粗分，然后再上柱粗分呢？一般这种直接水解的样品，然后上这么短的柱子，是没什么效果的
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12楼2014-04-22 22:42:34
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶
能不能上图？
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流星来时我许了个愿，愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具，久不看论坛一来就提问者，宁弃EPI和VIP也不回帖。
13楼2014-04-23 01:16:53
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飘渺尘埃

木虫 (小有名气)
我最近也在做这方面的东西，根据你的情况说点我的观点，希望对你有用。首先个人觉得你的样品浓度有点高，本人也做过50mg/mL的浓度，分离效果很不好，25就很好，大部分博士硕士论文的浓度也是25；第二，您的问题中没有提到流速，流速是影响分离效果的主 要因素，根据文献和我自己做实验的情况，我觉得0.5mL/min是比较合适的。第三，如其他人所说，你的柱子高度确实不高，柱子高度有点低。第四，还有可能就是你的多肽的分子量不在g25的分离范围内，你可以先做一下分子量分布，然后选择合适的凝胶。第五，你的收集管的体积要尽量小，这样你分开的峰才不会因收集量大而又混合在一起。希望对你有用。
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成功需要的条件很多，你我只需在一个条件下努力前行
14楼2014-04-23 09:47:24
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lim1896

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

水解后的肽大概是多少的分子量，如果太大或者接近，不好分离出来，而且，浓度不要太高，太高的话就过载了，哗啦一下跟流动相一样全出来了，再或者你多等几个柱体积，也许会有其他峰出现
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15楼2014-04-24 17:16:08
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李畅0527

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
10楼: Originally posted by //安生 at 2014-04-22 19:16:29
50mg/ml，100mg/ml，浓度大小感觉只影响峰的高低啊，，，你样品分子量多大？...

我也不知道，就是乳铁蛋白水解物，应该1000到8000范围挺广的。可能是柱子没装好吧。对了，请问你会用蛋白质纯化仪么？那什么AKTA。
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16楼2014-04-25 10:45:19
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李畅0527

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
11楼: Originally posted by ywlzwd at 2014-04-22 20:14:16
第一，是不是柱床不稳定，上的样品根本就没有进分子筛，而是直接边流造成的？所以只有一个峰。第二，就是洗脱时速度的控制，不应该太快，经验值应该是每分钟20滴的样子？第三，洗脱液中盐离子的浓度不应该太低，否则 ...

恩，我流速设的是1ml/min，20滴是0.8ml，差不多，第一点和第三点我确实应该再好好考虑下。谢谢。对了，请问你会用蛋白质纯化仪么？
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17楼2014-04-25 10:59:06
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李畅0527

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
14楼: Originally posted by 飘渺尘埃 at 2014-04-23 09:47:24
我最近也在做这方面的东西，根据你的情况说点我的观点，希望对你有用。首先个人觉得你的样品浓度有点高，本人也做过50mg/mL的浓度，分离效果很不好，25就很好，大部分博士硕士论文的浓度也是25；第二，您的问题中没 ...

恩恩，谢谢，挺有用的，我再做下试试。请问你会用蛋白质纯化仪么？
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18楼2014-04-25 11:03:56
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liuzhenhai

铁杆木虫 (正式写手)
多大的晒。

[ 发自小木虫客户端 ]
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19楼2014-04-25 11:35:16
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李畅0527

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
19楼: Originally posted by liuzhenhai at 2014-04-25 11:35:16
多大的晒。

筛？葡聚糖G25的胶，分离5000以下的。
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20楼2014-04-25 12:22:09
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