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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 层析/纯化 » GST纯化，洗脱时不出峰，检测有蛋白。
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aofeng860308

木虫 (正式写手)

[求助] GST纯化，洗脱时不出峰，检测有蛋白。 已有3人参与

如题，纯化一个带GST标签的蛋白，裂解Buffer和平衡Buffer为PBS+5%Triton x-100，洗脱Buffer为50mM Tris-Hcl+10mM 还原型谷胱甘肽。洗脱时，不但不出峰，峰值反倒出现负值，而且负得很多，-2000mAU左右。将收集的样品进行SDS-PAGE，发现洗脱中有目的蛋白，只是量不多。
想请教一下大神们，为什么会不出峰，反而会出现负值，之前纯化过的都是正常的。
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1楼 2014-06-17 13:41:55
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Davie_Meagen

新虫 (初入文坛)
纯属意外，检测器里可能有气泡导致的，很正常。
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2楼2014-06-17 15:57:47
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aofeng860308

木虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by Davie_Meagen at 2014-06-17 15:57:47
纯属意外，检测器里可能有气泡导致的，很正常。

不是气泡，最近做了几次都是出现这样。
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3楼2014-06-17 16:59:57
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lihuan0525

金虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
建议楼主收集后，做紫外检测。也可能是你仪器上的检测器有问题呢，这样对比一下就知道了，
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4楼2014-06-17 21:03:44
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wolfman840

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
youlinglyw: 金币+2, 赠人玫瑰手有余香，生物科学有你更精彩！ 2014-07-03 15:10:37
你的紫外吸收池是否定期用氢氧化钠或者稀盐酸清洗过？里面的氘灯是不是到寿命了要换了？偏光片或者光栅是不是要更换或校准？如果以前一直都好，没有预兆的出现持续异常情况，需要检查一下你的设备。
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5楼2014-07-03 13:30:25
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pudding9696

无虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

楼主参考下这个 http://muchong.com/bbs/viewthread.php?tid=7467723&fpage=1
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6楼2014-07-04 14:18:17
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