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铁虫 (初入文坛)

[交流] western blot出现多条带是什么原因

一抗是兔多抗,稀释度1:800;二抗1:3000,上样大约40ug,TBST洗膜3*10min,结果如图出现明显三条带(大约110、100、85KD),另外还有些微弱的条带,这个蛋白目前没人做过,预测的分子量是63kd,实际分子量未见报道,请问这是什么原因造成的?是蛋白量太大?抗体浓度太高?应该选用哪一条带?求高手解答

western blot出现多条带是什么原因
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yanjunyan

铁杆木虫 (著名写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
首先上样量可以,一般比较好做的蛋白40-50微克就可以了。一抗是多抗,会影响条带,因为特异性很差。再就是转膜的时候把条带剪窄一些,只覆盖目的条带的范围。还有就是建议用湿法转膜,效率高,效果好。可以试一下哈。
在平淡中给自己一个动力,在昂扬中留给自己一份淡泊,在匆忙中让心灵得到释放,在喧闹中找寻一片宁静的天空。
9楼2014-08-23 10:27:50
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Rubisco580

金虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
多抗特异性差,是可能出杂带的。一般主带比杂带深,但我也碰到过杂带深的……
上样量不算很大,我常用50ug。
可以试试一抗再稀一些或者用封闭用的牛奶来配,据说这样会减少杂带。
对你的实验不了解,用哪条带还得楼主自己多加分析
4楼2014-06-11 11:26:35
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jurkat.1640

至尊木虫 (文坛精英)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
分子量最接近的那条带可能性最大,有时候多克隆抗体的杂带还是很明显滴
5楼2014-06-11 12:23:21
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shilei916511

铁虫 (初入文坛)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
可能是蛋白变性不彻底,建议煮蛋白时间长点,另外感觉胶也有些问题。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
我懂我的偏执,默不作声或冷漠是我最大的容忍。
6楼2014-06-13 17:06:25
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