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一路向前看

铁虫 (初入文坛)

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注册: 2013-05-03
专业: 发育生物学

[交流] western blot出现多条带是什么原因

一抗是兔多抗，稀释度1:800；二抗1:3000，上样大约40ug，TBST洗膜3*10min，结果如图出现明显三条带（大约110、100、85KD），另外还有些微弱的条带，这个蛋白目前没人做过，预测的分子量是63kd，实际分子量未见报道，请问这是什么原因造成的？是蛋白量太大？抗体浓度太高？应该选用哪一条带？求高手解答

western blot出现多条带是什么原因

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1楼 2014-06-11 09:26:17

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Rubisco580

金虫 (小有名气)

BioEPI: 4
应助: 66 (初中生)
金币: 997.7
红花: 7
帖子: 264
在线: 48.5小时
虫号: 553802
注册: 2008-05-04
性别: GG
专业: 蛋白质组学

★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖

多抗特异性差，是可能出杂带的。一般主带比杂带深，但我也碰到过杂带深的……
上样量不算很大，我常用50ug。
可以试试一抗再稀一些或者用封闭用的牛奶来配，据说这样会减少杂带。
对你的实验不了解，用哪条带还得楼主自己多加分析

4楼2014-06-11 11:26:35

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