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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 免疫实验 » Western-blot 实验的目的条带
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weiyuanzheng

铜虫 (小有名气)

[求助] Western-blot 实验的目的条带 已有3人参与

各位老师，师兄师姐，最近做Western-blot实验，发现目的条带总是大于预测的大小，大致大0.3-0.5kDa左右，急切求解。是什么原因导致的呢，单抗是公司做的，抗原表位也没有错误。还有有师姐说可能是糖基化造成的，去除糖基化后，目的条带会变小至预测大小；我分析了一下大致有两个糖基化位点，这有可能吗？望各位大虾指教，谢谢啦
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没有人生来洒脱，都总是在哭过以后才会感到轻松许多。
1楼 2014-06-06 08:56:03
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qianjinyu

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
理论分子量和实际分子量（表观）差一点正常
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2楼2014-06-06 09:59:59
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weiyuanzheng

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by qianjinyu at 2014-06-06 09:59:59
理论分子量和实际分子量（表观）差一点正常

不是呀，写错啦，大致大了3kDa左右，分析了一下，糖基化位点两个，磷酸化位点好多！
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没有人生来洒脱，都总是在哭过以后才会感到轻松许多。
3楼2014-06-06 10:18:49
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weiyuanzheng

铜虫 (小有名气)
不好意思啊，写错啦，大致大3kDa左右。
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4楼2014-06-06 10:20:23
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jurkat.1640

至尊木虫 (文坛精英)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
蛋白质修饰是有可能的，不一定是糖基化。我的蛋白比预计大22 kDa，一直不知道为什么。
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5楼2014-06-06 10:29:06
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youlinglyw

荣誉版主 (著名写手)

一匡天下

优秀版主

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
一种可能是蛋白变性不彻底，所以条带差异，这种可能性比较小
而更大的可能性是蛋白质修饰的结果，最常见的是糖基化修饰
我以前做的western，糖基化修饰多了20多kda。
这是正常情况。
事实上，蛋白质电泳过程，精确的定义大小不现实，3kda的话，可以认为小小的修饰了下。要想确定精确大小，跑质谱
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天行健
6楼2014-06-06 10:49:13
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weiyuanzheng

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by youlinglyw at 2014-06-06 10:49:13
一种可能是蛋白变性不彻底，所以条带差异，这种可能性比较小
而更大的可能性是蛋白质修饰的结果，最常见的是糖基化修饰
我以前做的western，糖基化修饰多了20多kda。
这是正常情况。
事实上，蛋白质电泳过程，精 ...

恩，谢谢，师兄指点，看来去糖基化酶暂时不用买了
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7楼2014-06-10 13:32:50
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weiyuanzheng

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by youlinglyw at 2014-06-06 10:49:13
一种可能是蛋白变性不彻底，所以条带差异，这种可能性比较小
而更大的可能性是蛋白质修饰的结果，最常见的是糖基化修饰
我以前做的western，糖基化修饰多了20多kda。
这是正常情况。
事实上，蛋白质电泳过程，精 ...

很想再追问一下，目的条带附近有两条带，这两条是同一个蛋白的可能性大吗？而且相差很小。
Western-blot 实验的目的条带
图片1.jpg
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8楼2014-06-10 13:37:28
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youlinglyw

荣誉版主 (著名写手)

一匡天下

优秀版主
内容已删除
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天行健
9楼2014-06-10 14:36:32
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weiyuanzheng

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
9楼: Originally posted by youlinglyw at 2014-06-10 14:36:32
一般情况下不是，也不排除，如果是组织提取物，这种情况也比较多见。...

那我还想问下一，如果这两个胶点我送去跑质谱大概多少钱？只要测一下氨基酸序列，分子大小大概都在40kDa左右。
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没有人生来洒脱，都总是在哭过以后才会感到轻松许多。
10楼2014-06-12 14:47:06
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