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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » western blot 一抗孵育时用多少ml啊
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yuhan131481

铁虫 (小有名气)

[求助] western blot 一抗孵育时用多少ml啊

现在在做western blot ，膜有胶的一半大吧    一抗孵育时用8ml孵育   师姐一直说用1.5ml就好了    说我浪费抗体    求指教
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1楼 2013-07-03 00:02:49
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

bullfrog325

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
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137167741: 金币+2, 小木虫交流，共同进步~~ 2013-07-03 07:20:24
可以把膜卷进一个50ml 的管子里面, 膜的背面会贴住管壁的, 然后让管子滚动. 这样可以用很少体积的孵育溶液.
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3楼2013-07-03 00:39:06
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★
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137167741: 金币+2, 小木虫交流，共同进步~~ 2013-07-03 07:20:17
要看你的膜的面积有多大，还有就是膜放在什么里面孵育。一般来说，体积大一点效果会好一些。因为一抗、二抗一般都是过量的，我们实验室的一抗都是反复使用的。
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2楼2013-07-03 00:07:17
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zhouking8758

木虫 (正式写手)
★ ★
137167741: 金币+2, 小木虫交流，共同进步~~ 2013-07-03 07:21:01
实验室这么节约啊。。。。。。
无论多大体积，只要能有浸透膜就可以了
你们师姐建议1.5ml，可以参考啊。毕竟她这么做成功做。
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4楼2013-07-03 00:57:12
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yuhan131481

铁虫 (小有名气)
★
silicare: 金币+1, 杂交袋的确省抗体，不过也要让抗体在封口后能很好的流动才行，否则影响效果。 2013-07-04 15:47:05
引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-07-03 00:07:17
要看你的膜的面积有多大，还有就是膜放在什么里面孵育。一般来说，体积大一点效果会好一些。因为一抗、二抗一般都是过量的，我们实验室的一抗都是反复使用的。

你好 我们是在杂交袋里边儿孵育的  我的膜有3cm×9cm吧   我们实验室其他博士建议我用8ml   说1.5ml都太少了    想听下您的建议
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5楼2013-07-03 10:21:27
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zhouking8758

木虫 (正式写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by yuhan131481 at 2013-07-03 10:21:27
你好 我们是在杂交袋里边儿孵育的  我的膜有3cm×9cm吧   我们实验室其他博士建议我用8ml   说1.5ml都太少了    想听下您的建议...

我们一般6*9的膜，在盒子里采用10ml。
其实用量多少，只要达到目的就行。如果有人一直用1.5ml，而且没有问题，那么你可以参考她的方法。
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6楼2013-07-03 15:32:50
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★
137167741: 金币+1, 小木虫交流，共同进步~~ 2013-07-04 11:13:46
引用回帖:
5楼: Originally posted by yuhan131481 at 2013-07-03 10:21:27
你好 我们是在杂交袋里边儿孵育的  我的膜有3cm×9cm吧   我们实验室其他博士建议我用8ml   说1.5ml都太少了    想听下您的建议...

我觉得用5ml比较合适，只要你觉得液体在膜表面流动均匀就可以了。如果用1.5ml不影响结果，完全可以按照实验室的经验来做。
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7楼2013-07-03 23:06:44
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怕哦哦哦

捐助贵宾 (文坛精英)

【答案】应助回帖

★
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137167741: 金币+1, 小木虫交流，共同进步~~ 2013-07-04 11:13:56
silicare: 不是什么抗体都可以-20的 2013-07-04 15:45:43
我一般用3ml，用完可以冻在-20冰箱里，可以反复用3次，也不要用多，效果不好了
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8楼2013-07-04 10:02:07
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yakir

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
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137167741: 金币+1, 小木虫交流，共同进步~~ 2013-07-08 16:26:55
能覆盖膜就行了，1.5ml的话肯定会有合适的容器，只要你也使用你师姐同样的容器就行。
一般的孵育盒推荐用10ml，可以重复利用2-3次。
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一步一步！
9楼2013-07-04 15:06:43
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yuhan131481

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
9楼: Originally posted by yakir at 2013-07-04 15:06:43
能覆盖膜就行了，1.5ml的话肯定会有合适的容器，只要你也使用你师姐同样的容器就行。
一般的孵育盒推荐用10ml，可以重复利用2-3次。

好的  谢谢
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10楼2013-07-04 15:14:04
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