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deepocean123

新虫 (初入文坛)

[求助] 求助:原来可以纯化出来的蛋白现在纯化不出来了! 已有1人参与

本人之前构建了原核表达载体--pET30a,转入BL21后诱导原核表达,设置了0-6小时的诱导时间,可以明显看到从第二小时开始有目的带出现。但是,问题出现了,我最近又开始重新诱导这个蛋白,条件和之前都是一样的,我诱导不出来了!
本来认为是菌放的时间长了,活力降低,所以我就重新转化了BL21,但是经过诱导之后依然发现没有目的带。现在十分费解。有没有大神也遇到了这样的情况,请问是怎么解决的?谢谢大家了!
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pennchem

专家顾问 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
wizardfan: 金币+2, 谢谢参与 2014-06-03 01:05:45
(1) IPTG失效了?用别人诱导的IPTG试试
(2)BL21(DE3)失效了,新买的或者用别人用的好的试试
(3)基因突变了,测试试试?
行至水穷处,坐看云起时
2楼2014-06-02 20:35:37
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