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deepocean123

新虫 (初入文坛)

应助: 0 (幼儿园)
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在线: 20.5小时
虫号: 1685967
注册: 2012-03-12

[求助] 求助：原来可以纯化出来的蛋白现在纯化不出来了！已有1人参与

本人之前构建了原核表达载体--pET30a，转入BL21后诱导原核表达，设置了0-6小时的诱导时间，可以明显看到从第二小时开始有目的带出现。但是，问题出现了，我最近又开始重新诱导这个蛋白，条件和之前都是一样的，我诱导不出来了！
本来认为是菌放的时间长了，活力降低，所以我就重新转化了BL21，但是经过诱导之后依然发现没有目的带。现在十分费解。有没有大神也遇到了这样的情况，请问是怎么解决的？谢谢大家了！

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1楼 2014-06-02 10:32:43

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pennchem

专家顾问 (正式写手)

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专业: 生物大分子结构与功能
管辖: 生物科学

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
wizardfan: 金币+2, 谢谢参与 2014-06-03 01:05:45

（1） IPTG失效了？用别人诱导的IPTG试试
（2）BL21（DE3）失效了，新买的或者用别人用的好的试试
（3）基因突变了，测试试试？

行至水穷处，坐看云起时

2楼2014-06-02 20:35:37

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