| 查看: 2789 | 回复: 6 | |||
shiliyusly新虫 (小有名气)
|
[求助]
反向表达载体构建 已有1人参与
|
|
大家好，我现在初学载体构建方面知识。有2个问题查了很多资料都弄不明白。 1 PUCM-T载体插入PCR产物，由于PCR产物3‘端加A，PUCM-T载体是3’端加T，那岂不是只有正向基因的A才能和载体的T配对，反向的插入是连接不上的？ 2 构建好的PBI121表达载体进行酶切鉴定时，是直接将质粒酶切就跑电泳鉴定呢？还是酶切后PCR再电泳？一个模板上2个上游引物为什么PCR没产物呢？ 不好意思，感觉很低级的问题。。。 |
回复此楼» 猜你喜欢
PRMT5·MTA 抑制剂 MRTX1719 的科研应用
已经有0人回复
-
SW033291 科研使用解析：分子特征、储存与实验获取要点
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有135人回复
-
泛 RAS 抑制新思路：大环肽拟似物如何同时牵住突变型与野生型 RAS？
已经有0人回复
-
TYK2/JAK1 双靶点工具化合物 Brepocitinib：激酶选择性、研究进展与实验应用全解析
已经有0人回复
-
矢车菊素-3-O-葡萄糖苷质控实录：从一张HPLC图谱读懂纯度与稳定性
已经有0人回复
-
恩诺沙星（Enrofloxacin）科研解析：分子特征、LC-MS/MS 检测与实验室使用要点
已经有0人回复
-
Calderasib理化性质与实验操作技术笔记
已经有0人回复
-
RMC-6291怎么用？RAS(ON) 三重复合物工具化合物的实验室实操要点
已经有0人回复
-
苯并呋咱全解析：NBD 荧光衍生化试剂母核的化学特性与实验室应用
已经有0人回复
-
生物质炭与活化剂氢氧化钾混合注意事项
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 关于原核表达载体构建，跪求~~~~
已经有12人回复
- 构建过表达载体
已经有9人回复
- 原核表达引物设计求助~
已经有5人回复
- 原核表达载体构建- 遇到的一些问题···
已经有5人回复
- 双顺反子 表达载体的构建——求助！
已经有8人回复
- RNAi表达载体构建后，酶切切不开，怎么回事？
已经有4人回复
- 构建表达载体PBI121阳性对照
已经有5人回复
- 目的基因表达载体的构建问题~请指教
已经有6人回复
- 如何进行表达载体构建
已经有25人回复
- 表达载体构建 碱基突变 缺失 原因
已经有23人回复
- 沉默载体怎么构建？着急啊？一点都不懂
已经有8人回复
- 原核表达载体的构建
已经有37人回复
- 构建了个基因的表达载体，发现有一个氨基酸发生突变
已经有10人回复
- 原核表达载体构建，测序不成功
已经有20人回复
- 构建pBI121表达载体，目的基因与载体连接不上
已经有54人回复
- 构建植物表达载体pBI121带着GUS有木有影响啊
已经有9人回复
- 关于SiRNA表达载体构建的问题
已经有9人回复
- 表达载体的构建
已经有17人回复
- 表达载体构建的相关问题
已经有15人回复
- 已知全长基因怎样克隆并构建表达载体
已经有8人回复
- 【求助/交流】构建启动子+GUS表达载体，有人说可以带上完整编码区，可以吗？
已经有3人回复
- 【求助/交流】酿酒酵母表达载体的构建问题
已经有6人回复
- 【求助/交流】表达载体构建不成功的原因
已经有27人回复
- 【求助/交流】酿酒酵母真核表达载体构建和连接的问题
已经有6人回复
【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
shiliyusly: 金币+2 2014-05-23 16:39:33
gyesang: 金币+3, 鼓励回帖交流！ 2014-05-23 17:10:55
感谢参与，应助指数 +1
shiliyusly: 金币+2 2014-05-23 16:39:33
gyesang: 金币+3, 鼓励回帖交流！ 2014-05-23 17:10:55
|
1 PUCM-T载体插入PCR产物，由于PCR产物3‘端加A，PUCM-T载体是3’端加T，那岂不是只有正向基因的A才能和载体的T配对，反向的插入是连接不上的？ 是的，反向连不上。不过你要注意一般只有TAQ酶才会在产物上带a。一般的高保真酶的产物是不带a的，你需要自己加a。如果你想克隆反向产物，你就得找其他酶切位点，或者重写找个载体平端克隆。 2 构建好的PBI121表达载体进行酶切鉴定时，是直接将质粒酶切就跑电泳鉴定呢？还是酶切后PCR再电泳？一个模板上2个上游引物为什么PCR没产物呢？ 你得先提取质粒，然后酶切直接电泳。你也可以先pcr鉴定是否有片段插入，然后再提质粒酶切电泳。 |
2楼2014-05-23 16:08:16
3楼2014-05-23 16:10:37
shiliyusly
新虫 (小有名气)
- 应助: 4 (幼儿园)
- 金币: 265.4
- 散金: 17
- 红花: 1
- 帖子: 138
- 在线: 71.5小时
- 虫号: 1434769
- 注册: 2011-10-10
- 专业: 食品科学基础
4楼2014-05-23 16:38:06
shiliyusly
新虫 (小有名气)
- 应助: 4 (幼儿园)
- 金币: 265.4
- 散金: 17
- 红花: 1
- 帖子: 138
- 在线: 71.5小时
- 虫号: 1434769
- 注册: 2011-10-10
- 专业: 食品科学基础
5楼2014-05-23 16:39:26
6楼2014-05-23 16:51:10
7楼2014-05-23 16:56:06
