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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 培养/筛选 » 蓝白斑筛选时，结果都是白斑，可靠吗？
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dsjyd

金虫 (著名写手)

[求助] 蓝白斑筛选时，结果都是白斑，可靠吗？ 已有5人参与

我们整个实验室结果都是白斑，是的，不否认外源基因全都转入了载体的，可是感觉这个偶然未免机率也太大了吧！所以希望有智之士可以说一下自己的见解的，以解除个人疑虑！！！谢了

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在最好的年华里，不要辜负最美的自己
1楼 2014-05-23 11:05:56
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dsjyd

金虫 (著名写手)
唉，第一次整这个小木虫，竟然把整个内容写了4遍的，实属不易的，还好又长见识了，还希望虫友们误笑才好的，赶快回复吧。。。

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在最好的年华里，不要辜负最美的自己
2楼2014-05-23 11:08:24
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肥猫p

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
laozuzunzhe: 金币+1, 鼓励影虎！ 2014-05-24 09:13:10
我之前做蓝白斑的时候也几乎看不见蓝斑。现在T载体确实做的很牛。具体的你使用T载体的通用引物pcr一下，看看能否p出目的条带就知道了。
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3楼2014-05-23 11:13:53
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dsjyd

金虫 (著名写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 肥猫p at 2014-05-23 11:13:53
我之前做蓝白斑的时候也几乎看不见蓝斑。现在T载体确实做的很牛。具体的你使用T载体的通用引物pcr一下，看看能否p出目的条带就知道了。

这个下次实验差不多做的，到时再给你分享结果了！今天刚挑完菌的，哈哈，谢了哈

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在最好的年华里，不要辜负最美的自己
4楼2014-05-23 13:12:52
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dllchina

木虫 (著名写手)

有机的微生物大神

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
laozuzunzhe: 金币+1, 鼓励应助！ 2014-05-24 09:13:27
蓝白斑有一定作用，不过全白ban里面还是有自连的~~，现在基本不用了，致死基因比较靠谱点，就是贵点
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5楼2014-05-23 17:45:27
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王丹2013

金虫 (正式写手)
全实验室都是白斑的话该怀疑是不是X-gal失效了
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6楼2014-05-23 20:43:15
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万丽丽081222

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
有一下几种措施考虑：
1.抗生素失效。
2.做个空载对照，检查平板是否适合做蓝白斑筛选
3.挑白斑做PCR验证一下。
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learnenglish
7楼2014-05-24 11:24:31
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whatsao

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 王丹2013 at 2014-05-23 20:43:15
全实验室都是白斑的话该怀疑是不是X-gal失效了

X-Gal失效的话，是不会显色的，白色和蓝色都没有，就像普通菌的颜色。
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8楼2014-05-26 00:03:59
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zhang宇微

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
验证一下不就知道了！！！商业载体连接效率很高，我都不用蓝白斑筛选，不涂IPTG 什么的，直接在平板上挑菌做PCR，80％以上都是阳性有时候算是阳性。

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9楼2014-05-26 00:29:57
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王丹2013

金虫 (正式写手)
引用回帖:
8楼: Originally posted by whatsao at 2014-05-26 00:03:59
X-Gal失效的话，是不会显色的，白色和蓝色都没有，就像普通菌的颜色。...

晕 正常菌的颜色就是白的啊，当然木有那么白，相对而言。
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10楼2014-05-27 15:35:34
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