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289363400

铁杆木虫 (知名作家)

凌乱前进方向

[求助] SDS-PAGE图，最下面有条带，求指导。 已有1人参与

为什么我每次跑SDS-PAGE，如图所示，最下面都有一些条带呢？怎么能够消除这些条带呢？

SDS-PAGE图，最下面有条带，求指导。
IMG_2137.JPG
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1楼 2014-05-11 19:54:55
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sunrq516516

金虫 (小有名气)
让这些条带跑出去？？这个……不会是溶剂前沿吧= =？
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Permanent head Damage
2楼2014-05-12 14:36:59
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289363400

铁杆木虫 (知名作家)

凌乱前进方向
引用回帖:
2楼: Originally posted by sunrq516516 at 2014-05-12 14:36:59
让这些条带跑出去？？这个……不会是溶剂前沿吧= =？

嗯，我试着调低电压到70V跑了一次，无奈那些条带与我14kd的蛋白标准几乎无法分离。我不知道溶剂前沿是什么，能否为我解释一下？而且在电泳时可以看到上样缓冲液的蓝色已经全部进入电泳缓冲液中了，并且在这之后又有一段时间的电泳。
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3楼2014-05-12 19:48:54
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sunrq516516

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
哦 你是要分14KD的蛋白啊，你配的多少浓度的胶啊？要不要试试浓度更高的胶？

溶剂前沿……就是你那个放在sample里的是叫什么蓝来着（不知道中文叫啥……）反正就是你配样品时放的蓝色液体。但根据你说的又不太像是溶剂前沿。

那条带旁边的marker是多少的？还有你咋知道这就不是目的条带呢？是之后做MS的嘛？？
不知能不能转膜用抗体检测一下，会不会更specific一些……比如期待抗体不会识别这个你说的非目的条带？
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Permanent head Damage
4楼2014-05-12 20:28:15
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289363400

铁杆木虫 (知名作家)

凌乱前进方向
引用回帖:
4楼: Originally posted by sunrq516516 at 2014-05-12 20:28:15
哦 你是要分14KD的蛋白啊，你配的多少浓度的胶啊？要不要试试浓度更高的胶？

溶剂前沿……就是你那个放在sample里的是叫什么蓝来着（不知道中文叫啥……）反正就是你配样品时放的蓝色液体。但根据你说的又不太像 ...

嗯，我的目的蛋白在20kd左右。

其实也不是特别纠结，我就是想问问14kd左右的条带怎么能消除，我在文献上看到别人的图跑的很漂亮；之前在论坛上也看到有关的提问，但是似乎没有最终答案。

我配的是15%的胶，正在想是不是配更高浓度的胶或者是降低电压再跑。

是不是溴酚蓝，我想再做几次实验，仔细看看再说。溴酚蓝是指示剂，在电泳过程中呈蓝色跑在前面。

最后，感谢你的帮助哇。
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5楼2014-05-13 20:37:07
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