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jiangxincsu

金虫 (小有名气)

[求助] 蛋白诱导表达时候加IPTG的温度的问题 已有2人参与

我本科是学化学的第一次做分子生物学
摇菌的时候师姐告诉我在OD=0.8左右的时候用冷水降温到20度时再加IPTG然后再放到20度的摇床上低温表达
为什么不直接加了IPTG再放到20度的摇床上让它自己冷却呢?这样有什么不同?
师姐告诉我后者的做法会让表达量降低
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jiangxincsu

金虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by for5 at 2014-05-02 15:52:12
这不明显不同么。如果你是1,2ml液体量少无所谓,降温快,很快就达到设定温度。液体量大了,就需要一定时间才能达到预设温度。你这个是低温诱导,为的是可溶表达,温度高,蛋白合成快,形成包涵体,一般37度诱导,也 ...

恩恩,我有听师姐的话的 谢谢您的回答,但是我有个小小疑问
但是我们在诱导的时候是一直保持20度的,然后摇6个小时
并没有像您说的那样再拿37度诱导
而且我们在做另一种蛋白的时候用25度诱导,我们并没有降温,只是加了IPTG,它的表达量也很好的,这又是为什么呢?
3楼2014-05-03 13:20:39
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for5

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
这不明显不同么。如果你是1,2ml液体量少无所谓,降温快,很快就达到设定温度。液体量大了,就需要一定时间才能达到预设温度。你这个是低温诱导,为的是可溶表达,温度高,蛋白合成快,形成包涵体,一般37度诱导,也就3h左右就ok了。所以听师姐的话

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
操蛋的XX
2楼2014-05-02 15:52:12
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jurkat.1640

至尊木虫 (文坛精英)

【答案】应助回帖

IPTG加入后就开始诱导表达,此时温度高的话,有些蛋白表达太快会形成包涵体。
但是并非所有目的蛋白都要低温表达。
4楼2021-10-22 11:15:30
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