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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白/酶 » 蛋白诱导表达时候加IPTG的温度的问题
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jiangxincsu

金虫 (小有名气)

[求助] 蛋白诱导表达时候加IPTG的温度的问题 已有2人参与

我本科是学化学的第一次做分子生物学
摇菌的时候师姐告诉我在OD=0.8左右的时候用冷水降温到20度时再加IPTG然后再放到20度的摇床上低温表达
为什么不直接加了IPTG再放到20度的摇床上让它自己冷却呢？这样有什么不同？
师姐告诉我后者的做法会让表达量降低
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1楼 2014-05-02 14:49:15
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for5

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
这不明显不同么。如果你是1，2ml液体量少无所谓，降温快，很快就达到设定温度。液体量大了，就需要一定时间才能达到预设温度。你这个是低温诱导，为的是可溶表达，温度高，蛋白合成快，形成包涵体，一般37度诱导，也就3h左右就ok了。所以听师姐的话

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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操蛋的XX
2楼2014-05-02 15:52:12
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jiangxincsu

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by for5 at 2014-05-02 15:52:12
这不明显不同么。如果你是1，2ml液体量少无所谓，降温快，很快就达到设定温度。液体量大了，就需要一定时间才能达到预设温度。你这个是低温诱导，为的是可溶表达，温度高，蛋白合成快，形成包涵体，一般37度诱导，也 ...

恩恩，我有听师姐的话的 谢谢您的回答，但是我有个小小疑问
但是我们在诱导的时候是一直保持20度的，然后摇6个小时
并没有像您说的那样再拿37度诱导
而且我们在做另一种蛋白的时候用25度诱导，我们并没有降温，只是加了IPTG，它的表达量也很好的，这又是为什么呢？
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3楼2014-05-03 13:20:39
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jurkat.1640

至尊木虫 (文坛精英)

【答案】应助回帖

IPTG加入后就开始诱导表达，此时温度高的话，有些蛋白表达太快会形成包涵体。
但是并非所有目的蛋白都要低温表达。
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4楼2021-10-22 11:15:30
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