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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 存档旧帖 » 无IPTG诱导蛋白依然很好表达
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暗夜懒猫

银虫 (小有名气)

[求助] 无IPTG诱导蛋白依然很好表达

我新构建的PET质粒，转化大肠杆菌BL21中，最后的转化菌无需IPTG诱导蛋白依然可以很好的表达，敢问大家有没有相关的英文文献证明转化菌无需IPTG诱导，依旧可以表达蛋白的。  谢谢了！！！
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海之韵-哈哈

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1楼 2012-10-09 10:53:18
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protein780

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
我也遇到过这种情况，而且有的时候未诱导比诱导表达更明显，但是你确定那是你的目标蛋白吗？大肠杆菌体内大小差不多的很多啊
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2楼2012-10-09 11:20:29
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gwd0312

木虫 (正式写手)

“无冕之王”

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励应助 2012-10-09 15:49:33
暗夜懒猫: 金币+2 2012-10-15 08:20:40
这是很正常的啊，表达量高低和你的蛋白有很大关系，有些蛋白即使用ＩＰＴＧ诱导液不一定表达，我觉得你这个不需要用相关文献证明。如果你的实验结果可重复性很高的话，你的实验就有很好的说服力。
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持之以恒、永不放弃！
3楼2012-10-09 11:22:21
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暗夜懒猫

银虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by protein780 at 2012-10-09 11:20:29
我也遇到过这种情况，而且有的时候未诱导比诱导表达更明显，但是你确定那是你的目标蛋白吗？大肠杆菌体内大小差不多的很多啊

这个很确定 做过蛋白活性分析了  有活性 所以蛋白肯定表达了  但有没有相关文献支持啊
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4楼2012-10-09 11:27:14
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
Lac启动子有leaking。表达得很好指什么？你的蛋白在不加诱导的条件下与诱导条件相比的表达量相差多少？
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5楼2012-10-09 15:09:01
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Marado

金虫 (正式写手)

Dreamer

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-12-24 19:03:48
楼主用的什么载体，有些表达载体（pGEX系列）上面有Lac Iq，这个基因编码的是tac启动子区的操纵子的抑制蛋白
tac，防止外源基因在没有IPTG诱导情况下表达 。
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Look,ifyouhadoneshot,oroneopportunity,toseizeeverythingyoueverwanted,inonemoment.Wouldyoucaptureit,orjustletitslip?
6楼2012-10-09 15:11:40
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暗夜懒猫

银虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by cicelyzh at 2012-10-09 15:09:01
Lac启动子有leaking。表达得很好指什么？你的蛋白在不加诱导的条件下与诱导条件相比的表达量相差多少？

通过酶活性上来说表达很好， 通过SDS-PAGE电泳得出添加不添加IPTG表达量没有明显差异。
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7楼2012-10-10 16:06:50
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huiee

金虫 (正式写手)
我有个蛋白也是，不诱导也表达量很高，但是不溶啊 泪奔啊
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8楼2012-10-13 14:47:52
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xiuxiu190318

木虫 (正式写手)
请问楼主这个问题搞清楚了吗？我最近做实验也遇到了同样的问题，甚至不诱导都比诱导后表达量高，请问这是为什么呀？
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路在脚下！
9楼2012-12-24 14:47:08
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海之韵-哈哈

银虫 (小有名气)
送红花一朵
你好，楼主，最近我也在表达蛋白，遇到了和你一样的问题，不知楼主解决了吗？怎么解决的啊？这种现象正常吗？
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严以律已，宽以待人
10楼2013-09-29 22:18:06
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