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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » iptg诱导大肠表达，iptg加入的时间是什么时候？
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kaka1045

铜虫 (小有名气)

[求助] iptg诱导大肠表达，iptg加入的时间是什么时候？

我看有的人说是在对数生长末期之前加入，有的人说在OD0.5-0.7时加入，这个两个说法完全相反啊，一个是对数末期，一个是对数初期，应该是哪个呢?为什么呢？
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1楼 2013-09-23 21:35:30
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bio_apai

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
laozuzunzhe: 金币+2, 鼓励应助！ 2013-09-24 09:33:12
具体问题具体分析，什么时候最好需要用实验来确定，做几个梯度，如接种前，0.3,0.6.1,2等选择目的蛋白表达量最高时对应的od，还有别忘了做平行实验。
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2楼2013-09-24 06:54:48
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kaka1045

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by bio_apai at 2013-09-24 06:54:48
具体问题具体分析，什么时候最好需要用实验来确定，做几个梯度，如接种前，0.3,0.6.1,2等选择目的蛋白表达量最高时对应的od，还有别忘了做平行实验。

一般大肠最后长的OD多少？
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3楼2013-09-24 09:20:03
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laozuzunzhe

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
做个梯度实验看看就知道了
前期诱导可能增加代谢负担会导致最终菌长得不是很旺盛
对数后期诱导可避免对菌代谢负担这一问题因为菌本就即将停止对数增长
但针对特定实验而言，还是做个梯度实验比较靠谱
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4楼2013-09-24 09:32:57
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zxswuyin

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by kaka1045 at 2013-09-24 09:20:03
一般大肠最后长的OD多少？...

一般摇瓶的话，BL21大约是4
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5楼2013-09-24 13:26:29
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zxswuyin

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
摇瓶BL21一般长到OD到4左右
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6楼2013-09-24 13:27:58
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kaka1045

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by zxswuyin at 2013-09-24 13:26:29
一般摇瓶的话，BL21大约是4...

我做过他的生长曲线，也是大概4吧，9个小时吧，能长到，要是0.5几就开始诱导的话，那岂不是在对数期刚开始就诱导啊
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7楼2013-09-24 14:11:02
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phoenix211

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
在OD0.6左右开始诱导的话  菌长得不多  可以减少外源蛋白对宿主的负担  
在OD1。2左右开始诱导的话  菌长得多  蛋白液多  但是比较容易形成包涵体
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8楼2013-09-24 14:22:16
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kaka1045

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
8楼: Originally posted by phoenix211 at 2013-09-24 14:22:16
在OD0.6左右开始诱导的话  菌长得不多  可以减少外源蛋白对宿主的负担  
在OD1。2左右开始诱导的话  菌长得多  蛋白液多  但是比较容易形成包涵体

哦，这样啊
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9楼2013-09-24 14:41:09
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淘淘279

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
用的培养基是LB,还是其它的什么高密度发酵培养基呢？一般的LB的话，达到OD600 1左右加入诱导剂。高密度发酵培养基看有人能做到20左右

[ 发自小木虫客户端 ]
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你能做的永远不止这些！
10楼2013-09-24 20:26:44
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