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kaka1045

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
10楼: Originally posted by 淘淘279 at 2013-09-24 20:26:44
用的培养基是LB,还是其它的什么高密度发酵培养基呢?一般的LB的话,达到OD600 1左右加入诱导剂。高密度发酵培养基看有人能做到20左右

用的是LB基础,里面加了点糖和别的缓冲剂
11楼2013-09-25 10:00:54
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张香玲1017

铁杆木虫 (著名写手)

冷夜雨

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
以前也做IPTG诱导大肠杆菌,不同情况有不同的方法,培养基不一样OD值也不一样,生长时间相对来说相差也会很大,也是建议楼主做梯度实验,因为不了解你的实验情况所不能枉然下结论。自个摸索一下吧,其实很简单的,花费不了多长时间的。
希望大家多多交流。
12楼2013-09-25 10:45:26
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liuyuexinfei

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
我们一般选用0.6,但是也有选1左右
我选择,我喜欢;我喜欢我的选择。
13楼2013-09-25 10:51:21
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kaka1045

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
13楼: Originally posted by liuyuexinfei at 2013-09-25 10:51:21
我们一般选用0.6,但是也有选1左右

那诱导多少小时呢?一般,比如菌到稳定器是8个小时,到OD0.6的是2个小时,那诱导是诱导到他稳定期还是在稳定期时在延长时间?
14楼2013-09-25 11:17:36
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liuyuexinfei

木虫 (著名写手)

引用回帖:
14楼: Originally posted by kaka1045 at 2013-09-25 11:17:36
那诱导多少小时呢?一般,比如菌到稳定器是8个小时,到OD0.6的是2个小时,那诱导是诱导到他稳定期还是在稳定期时在延长时间?...

37度,到OD0.6,降温到16度,加IPTG,16度,降速到180转,16小时。收集菌体。或者直接37度诱导3小时
我选择,我喜欢;我喜欢我的选择。
15楼2013-09-26 09:10:41
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汪硕硕硕

新虫 (初入文坛)

那如果先摇 大肠杆菌1ml 摇了1天,摇到基本饱和,然后直接倒入10ml LB中,没有再摇起来,直接加入IPTG 1mM,16°C过夜摇,现在菌不是很多。如果现在把它又放到28°C 摇一天,能摇起来么?能诱导出蛋白么?
16楼2013-11-15 11:13:49
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yuhan131481

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

现在在做是OD600  0.6左右时   摇床降温到16度  一般要让摇瓶降下温的   20min左右  诱导
17楼2013-12-05 16:07:09
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