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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » iptg诱导大肠表达，iptg加入的时间是什么时候？
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kaka1045

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
10楼: Originally posted by 淘淘279 at 2013-09-24 20:26:44
用的培养基是LB,还是其它的什么高密度发酵培养基呢？一般的LB的话，达到OD600 1左右加入诱导剂。高密度发酵培养基看有人能做到20左右

用的是LB基础，里面加了点糖和别的缓冲剂
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11楼2013-09-25 10:00:54
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张香玲1017

铁杆木虫 (著名写手)

冷夜雨

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
以前也做IPTG诱导大肠杆菌，不同情况有不同的方法，培养基不一样OD值也不一样，生长时间相对来说相差也会很大，也是建议楼主做梯度实验，因为不了解你的实验情况所不能枉然下结论。自个摸索一下吧，其实很简单的，花费不了多长时间的。
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希望大家多多交流。
12楼2013-09-25 10:45:26
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liuyuexinfei

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
我们一般选用0.6，但是也有选1左右
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我选择，我喜欢；我喜欢我的选择。
13楼2013-09-25 10:51:21
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kaka1045

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
13楼: Originally posted by liuyuexinfei at 2013-09-25 10:51:21
我们一般选用0.6，但是也有选1左右

那诱导多少小时呢？一般，比如菌到稳定器是8个小时，到OD0.6的是2个小时，那诱导是诱导到他稳定期还是在稳定期时在延长时间？
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14楼2013-09-25 11:17:36
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liuyuexinfei

木虫 (著名写手)
引用回帖:
14楼: Originally posted by kaka1045 at 2013-09-25 11:17:36
那诱导多少小时呢？一般，比如菌到稳定器是8个小时，到OD0.6的是2个小时，那诱导是诱导到他稳定期还是在稳定期时在延长时间？...

37度，到OD0.6，降温到16度，加IPTG，16度，降速到180转，16小时。收集菌体。或者直接37度诱导3小时
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我选择，我喜欢；我喜欢我的选择。
15楼2013-09-26 09:10:41
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汪硕硕硕

新虫 (初入文坛)
那如果先摇 大肠杆菌1ml 摇了1天，摇到基本饱和，然后直接倒入10ml LB中，没有再摇起来，直接加入IPTG 1mM，16°C过夜摇，现在菌不是很多。如果现在把它又放到28°C 摇一天，能摇起来么？能诱导出蛋白么？
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16楼2013-11-15 11:13:49
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yuhan131481

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

现在在做是OD600  0.6左右时   摇床降温到16度  一般要让摇瓶降下温的   20min左右  诱导
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17楼2013-12-05 16:07:09
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