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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » iptg诱导大肠表达，iptg加入的时间是什么时候？
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kaka1045

铜虫 (小有名气)

[求助] iptg诱导大肠表达，iptg加入的时间是什么时候？

我看有的人说是在对数生长末期之前加入，有的人说在OD0.5-0.7时加入，这个两个说法完全相反啊，一个是对数末期，一个是对数初期，应该是哪个呢?为什么呢？
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1楼 2013-09-23 21:35:30
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汪硕硕硕

新虫 (初入文坛)
那如果先摇 大肠杆菌1ml 摇了1天，摇到基本饱和，然后直接倒入10ml LB中，没有再摇起来，直接加入IPTG 1mM，16°C过夜摇，现在菌不是很多。如果现在把它又放到28°C 摇一天，能摇起来么？能诱导出蛋白么？
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16楼2013-11-15 11:13:49
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bio_apai

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
laozuzunzhe: 金币+2, 鼓励应助！ 2013-09-24 09:33:12
具体问题具体分析，什么时候最好需要用实验来确定，做几个梯度，如接种前，0.3,0.6.1,2等选择目的蛋白表达量最高时对应的od，还有别忘了做平行实验。
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2楼2013-09-24 06:54:48
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kaka1045

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by bio_apai at 2013-09-24 06:54:48
具体问题具体分析，什么时候最好需要用实验来确定，做几个梯度，如接种前，0.3,0.6.1,2等选择目的蛋白表达量最高时对应的od，还有别忘了做平行实验。

一般大肠最后长的OD多少？
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3楼2013-09-24 09:20:03
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laozuzunzhe

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
做个梯度实验看看就知道了
前期诱导可能增加代谢负担会导致最终菌长得不是很旺盛
对数后期诱导可避免对菌代谢负担这一问题因为菌本就即将停止对数增长
但针对特定实验而言，还是做个梯度实验比较靠谱
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4楼2013-09-24 09:32:57
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