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KEVIN_LOVE木虫 (正式写手)
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[求助]
英雄，HELP！ 这个基因死活扩不出来啊 已有1人参与
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| 英雄们，大虾们，本人实验室菜鸟一枚，刚开始接触实验，就遇到了莫大的困难！扩一个预测的基因就是死活扩不出来啊！这个基因在NCBI中是存在的，但是是predicted（预测）的。刚开始师兄设计的几对引物都没扩出来，扩了N次！好不容易“扩出来了”，但是却不是从CDS的第一个ATG开始扩增的，就是缺少了前几十个碱基，本来可能是物种的不同而导致基因序列产生的差异，为了验证是不是如此，本人就从CDS的第一个ATG开始设计上游引物，下游引物在大约600个碱基左右（碱基少，相对容易好扩，仅仅是验证刚才的猜想，所以没有扩增全长），竟然扩出来了！所以，我们可以确定CDS序列是NCBI中预测的那样，因为根据第一次扩增出来的基因（缺少前几十个碱基）测序结果分析得知，已扩出的基因和NCBI中序列对比，仅存在个别碱基突变，所以我们才敢推测，这个基因应该就是NCBI中预测的序列。但是接下来又根据全长CDS设计引物，引物设计没有太大问题，但是就是死活扩不出来！说的可能很笼统，但是请各位有相似经历、经验或者知道这是怎么回事的大神帮着分析一下啊！感激不尽 |
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木虫 (著名写手)
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- 专业: 生物海洋学与海洋生物资源
2楼2014-04-26 16:39:28
