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唐萌2

新虫 (初入文坛)

[求助] RT- PCR 跑出来的带有几条,求助 已有2人参与

RT- PCR 跑出来的带有几条,求助

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唐萌2

新虫 (初入文坛)

最亮的那条是主带,为什么有其他杂带?
2楼2014-04-15 20:13:11
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Neo2000

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2014-04-16 08:56:26
引用回帖:
2楼: Originally posted by 唐萌2 at 2014-04-15 20:13:11
最亮的那条是主带,为什么有其他杂带?

是不是退火温度太低非特异性扩增比较厉害

[ 发自小木虫客户端 ]
3楼2014-04-15 20:52:03
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唐萌2

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by Neo2000 at 2014-04-15 20:52:03
是不是退火温度太低非特异性扩增比较厉害
...

退货温度一般文献52,我用的55
4楼2014-04-15 21:56:00
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Neo2000

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖


kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2014-04-16 08:56:31
引用回帖:
4楼: Originally posted by 唐萌2 at 2014-04-15 21:56:00
退货温度一般文献52,我用的55...

用blast算下,可再提高点试试

[ 发自小木虫客户端 ]
5楼2014-04-15 22:24:06
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黑夜孤狼

木虫 (正式写手)

请问你的marker是多少的啊?为什么有这么多条?我也是新手,低级问题莫怪。
策马扬刀,踏尽天下崎岖路。
6楼2014-04-22 21:33:53
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xygcdmr

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

退火温度太低,要先看一下引物的TM值是多少,如果是60左右,退火温度可以提高到59,甚至是60。再就是引物不够特异,不行就重新设计引物。如果是别人用过的引物,还可以缩短延伸时间。要根据你用的酶的特点,你的条带可能是最亮的,估计就是620bp,所以延伸时间不用太长,那个大的条带就不会有的。
7楼2014-04-23 00:51:15
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