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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » RT- PCR 跑出来的带有几条，求助
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唐萌2

新虫 (初入文坛)

[求助] RT- PCR 跑出来的带有几条，求助 已有2人参与

RT- PCR 跑出来的带有几条，求助

RT- PCR 跑出来的带有几条，求助
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1楼 2014-04-15 19:51:30
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唐萌2

新虫 (初入文坛)
最亮的那条是主带，为什么有其他杂带？
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2楼2014-04-15 20:13:11
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Neo2000

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2014-04-16 08:56:26
引用回帖:
2楼: Originally posted by 唐萌2 at 2014-04-15 20:13:11
最亮的那条是主带，为什么有其他杂带？

是不是退火温度太低非特异性扩增比较厉害

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3楼2014-04-15 20:52:03
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唐萌2

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by Neo2000 at 2014-04-15 20:52:03
是不是退火温度太低非特异性扩增比较厉害
...

退货温度一般文献52，我用的55
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4楼2014-04-15 21:56:00
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Neo2000

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2014-04-16 08:56:31
引用回帖:
4楼: Originally posted by 唐萌2 at 2014-04-15 21:56:00
退货温度一般文献52，我用的55...

用blast算下，可再提高点试试

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5楼2014-04-15 22:24:06
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黑夜孤狼

木虫 (正式写手)
请问你的marker是多少的啊？为什么有这么多条？我也是新手，低级问题莫怪。
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策马扬刀，踏尽天下崎岖路。
6楼2014-04-22 21:33:53
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xygcdmr

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

退火温度太低，要先看一下引物的TM值是多少，如果是60左右，退火温度可以提高到59，甚至是60。再就是引物不够特异，不行就重新设计引物。如果是别人用过的引物，还可以缩短延伸时间。要根据你用的酶的特点，你的条带可能是最亮的，估计就是620bp，所以延伸时间不用太长，那个大的条带就不会有的。
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7楼2014-04-23 00:51:15
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