24小时热门版块排行榜    

北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
查看: 1111  |  回复: 7

绛珠_仙草

银虫 (小有名气)

[求助] 蛋白表达问题 已有5人参与

各位前辈,小妹正在表达一个蛋白约35KD,纯化做多抗,现无法确定其是否表达,还请指教!
SDS-PAGE同时跑32a空载 包涵体和上清,结果在35KD左右均有条带,空载和上清较淡,包涵体35KD处很浓,本以为表达了 结果用HIS标签纯化柱纯化跑胶完全没有条带,用HIS的一抗做WESTERN也没有任何条带!不知道原因,有否表达?接下来是否可以直接切胶打兔子呢,时间紧迫,犯愁!
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

biostar2009

专家顾问 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流! 2014-04-09 17:09:29
你还是搞搞清楚再去打兔子吧,搞清楚表达没表达,最多一周,大兔子要几周?万一没表达慌忙火急最终还是浪费时间。
2楼2014-04-09 14:57:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

feilinshiji

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
妹子,空载都有条带就是不对啊,很明显没表达啊
3楼2014-04-09 23:39:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

547star

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
拿包涵体变性复性处理过再考虑上柱纯化。
为什么
4楼2014-04-10 08:21:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

c_jade

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
空载有条带,明显那个位置就不对呀,况且还纯化不出来,wb也没有。确定测序没问题了吗?会不会移框了
5楼2014-04-10 10:09:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

绛珠_仙草

银虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by biostar2009 at 2014-04-09 14:57:18
你还是搞搞清楚再去打兔子吧,搞清楚表达没表达,最多一周,大兔子要几周?万一没表达慌忙火急最终还是浪费时间。

请问怎样搞清楚到底表达没表达呢
6楼2014-04-10 12:36:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

绛珠_仙草

银虫 (小有名气)

引用回帖:
5楼: Originally posted by c_jade at 2014-04-10 10:09:34
空载有条带,明显那个位置就不对呀,况且还纯化不出来,wb也没有。确定测序没问题了吗?会不会移框了

没问题呀真不知道怎么回事 但是包涵体目的条带位置有很浓的带呢空载的很淡
7楼2014-04-10 12:40:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

力亮

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
你确定重组质粒构建正确了吗?主要是空载体还有条带,这下比较麻烦啊!  你没有纯化出来和WB没有做出来,(也有可能是菌体杂蛋白大小和你表达蛋白大小相当)所以你还是先别打兔子。
建议:1 从根源开始把问题捋一遍,质粒构建,测序结果,纯化过程中可能出现的问题。
祝福楼主一切顺利!
突然间的自我
8楼2014-04-12 12:45:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 绛珠_仙草 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 070300化学求调剂 +12 小黄鸭宝 2026-03-30 12/600 2026-03-31 19:15 by 253863592
[考研] 0856求调剂 +9 楒桉 2026-03-28 9/450 2026-03-31 19:06 by 暮泽12
[考研] 324分 085600材料与化工 +6 呆鹅oor 2026-03-27 6/300 2026-03-31 19:03 by xixiangyue6220
[考研] 本2一志愿C9-333分,材料科学与工程,求调剂 +9 升升不降 2026-03-31 9/450 2026-03-31 18:01 by 无际的草原
[考研] 290分调剂求助 +10 吉祥止止陈 2026-03-25 10/500 2026-03-31 17:54 by 544594351
[考研] 308求调剂 +11 墨墨漠 2026-03-25 11/550 2026-03-31 17:54 by 无际的草原
[考研] 346求调剂 一志愿070303有机化学 +11 萝卜炖青菜 2026-03-28 12/600 2026-03-31 17:54 by xhai2011
[考研] 330分求调剂 +6 qzenlc 2026-03-29 6/300 2026-03-31 16:44 by Wang200018
[考研] 311求调剂 +9 蓝月亮亮 2026-03-30 9/450 2026-03-31 16:32 by yedezhan
[考研] 本科211生物医学工程085409求调剂339分 +7 里子木yy 2026-03-29 7/350 2026-03-31 14:35 by fmesaito
[考研] 320分,材料与化工专业,求调剂 +10 一定上岸aaa 2026-03-27 14/700 2026-03-31 10:47 by foria
[考研] 一志愿食品科学与工程083200求调剂 +4 XQTJZ 2026-03-30 4/200 2026-03-31 04:10 by fmesaito
[考研] 哈尔滨工业大学材料与化工专硕378求调剂 +3 塔比乌斯 2026-03-30 3/150 2026-03-30 22:55 by 无际的草原
[考研] 317分 一志愿南理工材料工程 本科湖工大 求调剂 +12 芋泥小铃铛 2026-03-28 12/600 2026-03-30 17:06 by wangjy2002
[考研] 332求调剂 +6 @MZB382400 2026-03-28 6/300 2026-03-30 16:57 by 无际的草原
[考研] 一志愿中南大学化学0703总分337求调剂 +6 niko- 2026-03-27 6/300 2026-03-30 10:25 by herarysara
[考研] 337求调剂 +6 《树》 2026-03-29 6/300 2026-03-30 10:15 by herarysara
[考研] 332求92调剂 +8 蕉蕉123 2026-03-28 8/400 2026-03-29 10:46 by 周梓丹
[考研] 一志愿211院校 344分 东北农业大学生物学学硕,求调剂 +5 丶风雪夜归人丶 2026-03-26 8/400 2026-03-27 19:22 by 丶风雪夜归人丶
[考研] 调剂推荐 +5 清酒714 2026-03-26 6/300 2026-03-27 11:12 by 不吃魚的貓
信息提示
请填处理意见