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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 层析/纯化 » 可溶性蛋白透析后出现沉淀，是否可以用来做动物实验
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wqertyre

至尊木虫 (职业作家)

[求助] 可溶性蛋白透析后出现沉淀，是否可以用来做动物实验 已有2人参与

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善由心生
1楼 2014-03-25 16:34:11
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wqertyre

至尊木虫 (职业作家)
可溶性过完Ni柱，蛋白浓度太低，用透析袋透析完准备浓缩，但透析完出现沉淀
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善由心生
2楼2014-03-25 16:44:04
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yuanyuanlg01

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
wqertyre: 金币+1 2014-03-26 21:55:24
那也就是说你的蛋白在高浓度下不稳定？还是因为你的过膜使得蛋白溶液不稳定的。这个事情的话，我觉得你可以去一些沉淀做一下复溶实验，检查一下活性。如果一切欧克，我觉得就能用。但是如果复溶出现问题或者说活性差很多。我觉得你可以在查找一下该蛋白的浓缩条件。希望有所帮助，多多交流
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3楼2014-03-25 20:51:37
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wolfman840

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
wqertyre: 金币+1 2014-03-26 21:55:29
你做动物实验前，把蛋白稀释一下，如果不能溶解。那么就不能做动物实验了，因为你蛋白结构已经改变，产生沉淀了。考察一下你溶液的pH是不是离pI比较接近。
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4楼2014-03-26 12:56:46
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wqertyre

至尊木虫 (职业作家)
引用回帖:
4楼: Originally posted by wolfman840 at 2014-03-26 12:56:46
你做动物实验前，把蛋白稀释一下，如果不能溶解。那么就不能做动物实验了，因为你蛋白结构已经改变，产生沉淀了。考察一下你溶液的pH是不是离pI比较接近。

今天用pbs洗了一下，发现是可溶的，是不是可以用来做动物实验呢
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善由心生
5楼2014-03-26 21:54:50
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wqertyre

至尊木虫 (职业作家)
引用回帖:
3楼: Originally posted by yuanyuanlg01 at 2014-03-25 20:51:37
那也就是说你的蛋白在高浓度下不稳定？还是因为你的过膜使得蛋白溶液不稳定的。这个事情的话，我觉得你可以去一些沉淀做一下复溶实验，检查一下活性。如果一切欧克，我觉得就能用。但是如果复溶出现问题或者说活性差 ...

这个蛋白不是酶，不能检测活性
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善由心生
6楼2014-03-26 21:56:42
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yuanyuanlg01

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

引用回帖:
6楼: Originally posted by wqertyre at 2014-03-26 21:56:42
这个蛋白不是酶，不能检测活性...

这个不是酶的问题，不光是酶有活性的。譬如你的蛋白是功能蛋白，如果变性了，结合的位点因为变性翻转或者隐藏官能团的改变等等，哪怕是毒蛋白也是有作用位点和官能团的，有些毒蛋白高温加热就没有毒了。要看你的蛋白到底是什么，具体问题具体分析。希望能理解我的意思并且有帮助，多多交流谢谢
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7楼2014-03-28 17:13:21
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yuanyuanlg01

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by wqertyre at 2014-03-26 21:56:42
这个蛋白不是酶，不能检测活性...

我的意思是，如果你和什么东西结合的话你可以在体外试一下，反正你在体内有作用也要有体外实验进行对照的，况且体内实验应该普遍比体外实验贵的吧。譬如你的蛋白结合某种基因或者是小分子，你可以先做体外实验的，这个数据你都是需要的呀。
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8楼2014-03-28 17:15:49
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wolfman840

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
5楼: Originally posted by wqertyre at 2014-03-26 21:54:50
今天用pbs洗了一下，发现是可溶的，是不是可以用来做动物实验呢...

你可以尝试做做动物实验看看。如果可溶了就没问题了。蛋白变性了的话会有明显的结构改变，会有沉淀的。
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9楼2014-04-14 10:15:47
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