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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 请教荧光定量PCR结果图？我的这张能看出来什么问题？
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菜菜0929

木虫 (小有名气)

[求助] 请教荧光定量PCR结果图？我的这张能看出来什么问题？ 已有3人参与

以上是我做荧光定量PCR时内参基因的动力学曲线图和融合曲线图，请教一下怎么看？能看出来cDNA浓度不一致吗

请教荧光定量PCR结果图？我的这张能看出来什么问题？
1.png


请教荧光定量PCR结果图？我的这张能看出来什么问题？-1
2.png
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你所浪费的今天是昨天死去的人所奢望的明天，你所厌恶的现在是你回不去的曾经，活在当下
1楼 2014-03-20 21:10:45
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

咆哮的白菜

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-03-21 10:28:40
菜菜0929: 金币+1, ★★★很有帮助 2014-03-21 11:10:57
非特异性扩增，模板浓度比较高，扩增效率不好，问题挺多，数据基本不可用。

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姥姥不疼，舅舅不爱
6楼2014-03-21 09:11:16
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jiaolong11a

新虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 菜菜0929 at 2014-03-21 11:06:47
我是想做一个内参基因，一个靶基因，然后按照2-ΔΔCt法作图，不知道这样是否可以消除cDNA模板浓度不一致的影响?...

是可以消除，但有非特异性扩增，这个数据就不准了，建议做个标准曲线，看看是不是成线性，如果不是，就要换引物来了
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多情总被无情扰。。。愁
10楼2014-03-21 11:26:05
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普通回帖

steamsn

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-03-21 10:27:53
菜菜0929: 金币+1, ★★★很有帮助 2014-03-21 11:10:34
cDNA浓度就是模板浓度，看Ct值，熔解曲线看引物非特异性扩增，是否单一峰
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我命由我不由天
2楼2014-03-20 21:22:58
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牛奶可乐

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
菜菜0929: 金币+1 2014-03-21 11:10:43
菜菜0929(gyesang代发): 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-03-31 19:51:10
第二张扩增曲线图，比较每一条曲线与基线所对应的横坐标的CT值，CT值越大的代表模板浓度越大。不知道清除了不
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付出就会有收获
3楼2014-03-21 08:25:59
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牛奶可乐

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-03-21 10:28:26
菜菜0929: 金币+3, ★★★很有帮助 2014-03-21 11:00:19
第二张扩增曲线图，比较每一条曲线与基线所对应的横坐标的CT值，CT值越大的代表模板浓度越小。不知道清除了不

不好意思。。。刚才写错了
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付出就会有收获
4楼2014-03-21 08:27:08
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jiaolong11a

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
菜菜0929: 金币+2, ★★★很有帮助 2014-03-21 11:02:23
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-03-31 19:51:30
你的溶解曲线看出有非特异性扩增，不怎么好。看扩增曲线的话，浓度是有差距的，最大值和最小值之间估计得有10倍
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多情总被无情扰。。。愁
5楼2014-03-21 08:48:42
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菜菜0929

木虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by jiaolong11a at 2014-03-21 08:48:42
你的溶解曲线看出有非特异性扩增，不怎么好。看扩增曲线的话，浓度是有差距的，最大值和最小值之间估计得有10倍

我是想做一个内参基因，一个靶基因，然后按照2-ΔΔCt法作图[ΔΔCt＝（Ct靶基因－Ct内参）处理组－（Ct靶基因－Ct内参）对照组]，不知道这样是否可以消除cDNA模板浓度不一致的影响?
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你所浪费的今天是昨天死去的人所奢望的明天，你所厌恶的现在是你回不去的曾经，活在当下
7楼2014-03-21 11:06:47
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菜菜0929

木虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 牛奶可乐 at 2014-03-21 08:27:08
第二张扩增曲线图，比较每一条曲线与基线所对应的横坐标的CT值，CT值越大的代表模板浓度越小。不知道清除了不

不好意思。。。刚才写错了

我是想做一个内参基因，一个靶基因，然后按照2-ΔΔCt法作图[ΔΔCt＝（Ct靶基因－Ct内参）处理组－（Ct靶基因－Ct内参）对照组]，不知道这样是否可以消除cDNA模板浓度不一致的影响?
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你所浪费的今天是昨天死去的人所奢望的明天，你所厌恶的现在是你回不去的曾经，活在当下
8楼2014-03-21 11:09:56
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菜菜0929

木虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 咆哮的白菜 at 2014-03-21 09:11:16
非特异性扩增，模板浓度比较高，扩增效率不好，问题挺多，数据基本不可用。

我是想做一个内参基因，一个靶基因，然后按照2-ΔΔCt法作图[ΔΔCt＝（Ct靶基因－Ct内参）处理组－（Ct靶基因－Ct内参）对照组]，不知道这样是否可以消除cDNA模板浓度不一致的影响?
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9楼2014-03-21 11:17:56
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