【答案】应助回帖

11楼2014-03-21 11:28:44

菜菜0929

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6楼: Originally posted by 咆哮的白菜 at 2014-03-21 09:11:16
非特异性扩增，模板浓度比较高，扩增效率不好，问题挺多，数据基本不可用。

从哪看出来模板浓度高的？

你所浪费的今天是昨天死去的人所奢望的明天，你所厌恶的现在是你回不去的曾经，活在当下

12楼2014-03-21 13:38:18

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10楼: Originally posted by jiaolong11a at 2014-03-21 11:26:05
是可以消除，但有非特异性扩增，这个数据就不准了，建议做个标准曲线，看看是不是成线性，如果不是，就要换引物来了...

怎么做？用什么仪器？什么试剂？

你所浪费的今天是昨天死去的人所奢望的明天，你所厌恶的现在是你回不去的曾经，活在当下

13楼2014-03-21 15:45:06

菜菜0929

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我还想问一下，我把内参基因和靶基因的样一起做，靶基因的孔时方框里面带一个X的未知样品，那内参基因用什么孔啊？标准品？阴性对照？阳性对照？

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14楼2014-03-21 17:16:10

咆哮的白菜

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12楼: Originally posted by 菜菜0929 at 2014-03-21 13:38:18
从哪看出来模板浓度高的？...

CT值低，浓度高，一般CT在20到30左右好点

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姥姥不疼，舅舅不爱

15楼2014-03-21 23:40:06

咆哮的白菜

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9楼: Originally posted by 菜菜0929 at 2014-03-21 11:17:56
我是想做一个内参基因，一个靶基因，然后按照2-ΔΔCt法作图，不知道这样是否可以消除cDNA模板浓度不一致的影响?...

qRT-pcr不是一句两句能说清楚的，建议你找一个比较懂的，给你彻底讲一讲，涉及的东西比较多

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姥姥不疼，舅舅不爱

16楼2014-03-21 23:45:02

菜菜0929

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我还想问一下怎么避免稀释完的cDNA反复冻融？我想把它放到-4℃可以吗？我打算1周内做完

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17楼2014-03-24 16:07:30

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17楼: Originally posted by 菜菜0929 at 2014-03-24 16:07:30
我还想问一下怎么避免稀释完的cDNA反复冻融？我想把它放到-4℃可以吗？我打算1周内做完...

是4度，刚写错了

你所浪费的今天是昨天死去的人所奢望的明天，你所厌恶的现在是你回不去的曾经，活在当下

18楼2014-03-24 16:08:39

min8717

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4楼: Originally posted by 牛奶可乐 at 2014-03-21 08:27:08
第二张扩增曲线图，比较每一条曲线与基线所对应的横坐标的CT值，CT值越大的代表模板浓度越小。不知道清除了不

不好意思。。。刚才写错了

这个不一定的，又是模板浓度太大了，反而会起抑制作用，CT值反而大

天助自助者

19楼2014-03-24 16:17:56

min8717

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7楼: Originally posted by 菜菜0929 at 2014-03-21 11:06:47
我是想做一个内参基因，一个靶基因，然后按照2-ΔΔCt法作图，不知道这样是否可以消除cDNA模板浓度不一致的影响?...

这就是相对定量法嘛，是要这样做的啊

天助自助者

20楼2014-03-24 16:18:45