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691806321

新虫 (初入文坛)


[交流] 跪求质粒酶切载体去磷酸化问题!

最近一直在做酶切载体去磷酸化的实验。因为目的载体和要连入的片段都是用SmaI单酶切后,然后在连接,所以载体需要去磷酸化。但做了好多次了都没有连上,但是自连,要不就是不长单克隆。求各位大神,指点。
     我用的是CIAP,TAKARA公司的,
       DNA  2~3μg                  
       CIAP 1μL         
       10×Ap buffer  5μL      
        补水至 50μL  
替他小体系的也试过
50摄氏度,反应30min。然后PCI,CI抽提 ,-20摄氏度,乙醇沉淀9h。然后就75%洗,然后用10ul融解。最后回收到的DNA很少。最近一次回收的量是15ng/ul,连接完,涂平板,挑的单克隆摇不起来 。  
做了好多次,崩溃了,老板催的紧,求指教!!!谢谢
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鬼羽帝魂

木虫 (著名写手)



小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
你不会是小蒋吧???
2楼2014-03-17 16:52:36
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