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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 电泳图中出现的杂带是什么原因
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摩羯的心

铁虫 (小有名气)

[求助] 电泳图中出现的杂带是什么原因 已有8人参与

各位虫友，帮我分析一下电泳图中出现杂带的原因吧  下面大约186bp大小的条带是我的目的条带，上面两条比较暗的是杂带，我是直接用PCR产物没有纯化，稀释后直接当作下一步PCR的模板，之前退火温度55度也是出现这种情况，我把退火温度调成58度后还是有杂带，25ul的体系我taq酶用量是0.3ul，模板的用量大约在80ng左右，大家帮忙分析一下出现这种现象的原因吧  谢谢啦！

电泳图中出现的杂带是什么原因
无标题.jpg
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1楼 2014-03-14 08:34:03
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

晶晶梁

新虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 摩羯的心 at 2014-03-15 20:31:08
那你是怎么处理的呢 我打算将PCR产物纯化后再进行第二步PCR...

嗯嗯..切胶回收吧，我之前因为非特异性太厉害了，就重新用自己的DNA扩增的
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6楼2014-03-16 21:46:55
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普通回帖

njuzhangxin

铁杆木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
摩羯的心(kx444555代发): 金币+2, 鼓励交流 2014-03-14 09:22:33
摩羯的心: 金币+1 2014-03-14 09:32:18
引物特异性并不是太好，与模板有非特异性结合，如果追求单一带，重新设计引物。
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2楼2014-03-14 09:11:44
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dongguolang

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-03-14 13:24:57
提高退火温度，或者切角回收，把目的条带切出来，
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3楼2014-03-14 10:56:55
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晶晶梁

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
摩羯的心(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-03-14 13:24:47
引物不是特别好的话，PCR产物容易出现非特异性条带，可能第一次PCR不明显，但是用PCR产物当模板后扩增出来就很明显了，我之前也出现过这样的情况。
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4楼2014-03-14 12:26:38
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摩羯的心

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 晶晶梁 at 2014-03-14 12:26:38
引物不是特别好的话，PCR产物容易出现非特异性条带，可能第一次PCR不明显，但是用PCR产物当模板后扩增出来就很明显了，我之前也出现过这样的情况。

那你是怎么处理的呢 我打算将PCR产物纯化后再进行第二步PCR
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5楼2014-03-15 20:31:08
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lvbobo823

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
摩羯的心: 金币+1 2014-03-17 08:25:30
引物非特异性扩增，第一次PCR产物没纯化导致第二次特异性带更明显。
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hehe
7楼2014-03-17 07:58:44
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heguijuan

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

这个应该就是引物特异性不高啦。建议提高退火温度试试看，不行的话就只能重新设计引物了。
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8楼2014-04-02 10:04:53
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月夜饮雪

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

看样是有非特异性阔增，可以考虑纯化一下在进行下步pcr

[ 发自小木虫客户端 ]
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9楼2014-04-02 13:34:53
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skyveblue

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

不知道你用的是什么模板，如果是质粒，有可能是反向跑的条带。另外不建议用pcr产物二次扩增，容易出现突变。
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10楼2014-04-02 13:39:48
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