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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » DNA凝胶电泳图
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rubie

银虫 (小有名气)

[求助] DNA凝胶电泳图

各位大牛：
     本人最近提取的DNA都如图所示，我是想做定量PCR，这DNA可否进行qPCR?并且能否告诉我这种现象是什么原因造成的？（用试剂盒提取的，只是步骤进行了改进）。求指教
DNA凝胶电泳图
Owner 2013-08-30 00 小时 55 分钟第15周DNA 5-10 结果.jpg
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just do it
1楼 2013-09-02 16:29:12
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dehong1573

至尊木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
amisking: 金币+2, 鼓励发帖交流 2013-09-02 21:25:15
是基因组DNA吗，应该是有降解，什么样品提的，菌，植物还是细胞，定量的目的是什么了，计样品中的细胞数？讲的太过粗略了！
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科学永无止境,只有合作共享才能更好地……
2楼2013-09-02 19:17:41
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yan.007133

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
amisking: 金币+1, 鼓励发帖交流 2013-09-02 21:25:21
qPCR的话，不是应该cDNA才对吗，为什么用DNA？
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3楼2013-09-02 19:18:18
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rubie

银虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by dehong1573 at 2013-09-02 19:17:41
是基因组DNA吗，应该是有降解，什么样品提的，菌，植物还是细胞，定量的目的是什么了，计样品中的细胞数？讲的太过粗略了！

是提的土壤中的DNA，定量特异性基因片段的多少
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just do it
4楼2013-09-02 22:51:22
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rubie

银虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by yan.007133 at 2013-09-02 19:18:18
qPCR的话，不是应该cDNA才对吗，为什么用DNA？

qPCR也可以直接用DNA来进行定量的。
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just do it
5楼2013-09-02 22:57:58
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2013-09-04 20:52:09
感觉胶或者电泳有问题，marker也是歪歪斜斜的。条带下面糊糊的可能样品里有其它杂质。
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6楼2013-09-03 00:24:29
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grape_vine

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2013-09-04 20:52:18
这个应该是胶的问题,DNA不好判断绝对的好坏,但是看上去还是不错的.
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7楼2013-09-03 08:06:22
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dehong1573

至尊木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2013-09-04 20:52:29
引用回帖:
4楼: Originally posted by rubie at 2013-09-02 22:51:22
是提的土壤中的DNA，定量特异性基因片段的多少...

样品中的蛋白倒除的挺干净的，不过确实应该是有降解，个人觉得会影响后面的定量，建议再优化下方法！
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科学永无止境,只有合作共享才能更好地……
8楼2013-09-03 08:41:53
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rubie

银虫 (小有名气)
引用回帖:
8楼: Originally posted by dehong1573 at 2013-09-03 08:41:53
样品中的蛋白倒除的挺干净的，不过确实应该是有降解，个人觉得会影响后面的定量，建议再优化下方法！...

亲，有没有什么好的方法啊？我已进行了RNA污染和蛋白质污染排查，发现都不是这种现象。。。。我提出来的DNA全部都是这个样子呀
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just do it
9楼2013-09-03 11:07:37
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rubie

银虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-09-03 00:24:29
感觉胶或者电泳有问题，marker也是歪歪斜斜的。条带下面糊糊的可能样品里有其它杂质。

大牛，你能否给学生一点建议？我昨天进行了RNA（加RNA酶）和蛋白质污染（将生工试剂盒从加入蛋白沉淀液的过程走了一遍）排查，觉得这两种污染都不是的。由于我提出来的DNA基本都是这种现象，不知道该如何解决，确实着急啊。恳请大牛们帮帮忙来一起解决掉这种奇怪的拖尾现象。谢谢
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just do it
10楼2013-09-03 11:12:58
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