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rubie

银虫 (小有名气)

[求助] DNA凝胶电泳图

各位大牛:
     本人最近提取的DNA都如图所示,我是想做定量PCR,这DNA可否进行qPCR?并且能否告诉我这种现象是什么原因造成的?(用试剂盒提取的,只是步骤进行了改进)。求指教
DNA凝胶电泳图
Owner 2013-08-30 00 小时 55 分钟第15周DNA 5-10 结果.jpg
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dehong1573

至尊木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
amisking: 金币+2, 鼓励发帖交流 2013-09-02 21:25:15
是基因组DNA吗,应该是有降解,什么样品提的,菌,植物还是细胞,定量的目的是什么了,计样品中的细胞数?讲的太过粗略了!
科学永无止境,只有合作共享才能更好地……
2楼2013-09-02 19:17:41
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yan.007133

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
amisking: 金币+1, 鼓励发帖交流 2013-09-02 21:25:21
qPCR的话,不是应该cDNA才对吗,为什么用DNA?
3楼2013-09-02 19:18:18
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rubie

银虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by dehong1573 at 2013-09-02 19:17:41
是基因组DNA吗,应该是有降解,什么样品提的,菌,植物还是细胞,定量的目的是什么了,计样品中的细胞数?讲的太过粗略了!

是提的土壤中的DNA,定量特异性基因片段的多少
just do it
4楼2013-09-02 22:51:22
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rubie

银虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by yan.007133 at 2013-09-02 19:18:18
qPCR的话,不是应该cDNA才对吗,为什么用DNA?

qPCR也可以直接用DNA来进行定量的。
just do it
5楼2013-09-02 22:57:58
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★
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gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流! 2013-09-04 20:52:09
感觉胶或者电泳有问题,marker也是歪歪斜斜的。条带下面糊糊的可能样品里有其它杂质。
6楼2013-09-03 00:24:29
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grape_vine

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流! 2013-09-04 20:52:18
这个应该是胶的问题,DNA不好判断绝对的好坏,但是看上去还是不错的.
7楼2013-09-03 08:06:22
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dehong1573

至尊木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流! 2013-09-04 20:52:29
引用回帖:
4楼: Originally posted by rubie at 2013-09-02 22:51:22
是提的土壤中的DNA,定量特异性基因片段的多少...

样品中的蛋白倒除的挺干净的,不过确实应该是有降解,个人觉得会影响后面的定量,建议再优化下方法!
科学永无止境,只有合作共享才能更好地……
8楼2013-09-03 08:41:53
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rubie

银虫 (小有名气)

引用回帖:
8楼: Originally posted by dehong1573 at 2013-09-03 08:41:53
样品中的蛋白倒除的挺干净的,不过确实应该是有降解,个人觉得会影响后面的定量,建议再优化下方法!...

亲,有没有什么好的方法啊?我已进行了RNA污染和蛋白质污染排查,发现都不是这种现象。。。。我提出来的DNA全部都是这个样子呀
just do it
9楼2013-09-03 11:07:37
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rubie

银虫 (小有名气)

引用回帖:
6楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-09-03 00:24:29
感觉胶或者电泳有问题,marker也是歪歪斜斜的。条带下面糊糊的可能样品里有其它杂质。

大牛,你能否给学生一点建议?我昨天进行了RNA(加RNA酶)和蛋白质污染(将生工试剂盒从加入蛋白沉淀液的过程走了一遍)排查,觉得这两种污染都不是的。由于我提出来的DNA基本都是这种现象,不知道该如何解决,确实着急啊。恳请大牛们帮帮忙来一起解决掉这种奇怪的拖尾现象。谢谢
just do it
10楼2013-09-03 11:12:58
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