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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 测序测不出来，求高手解答
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寂寞又美好

金虫 (小有名气)

[求助] 测序测不出来，求高手解答 已有6人参与

各位前辈们，本人前端时间克隆了两个基因但是总是测不出来，求解答。菌液PCR验证的图和我胶回收的图是一致的，但是测了两次都没测出来、。
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1楼 2014-03-07 21:34:33
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Lau_Kimura

铁虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2014-03-08 12:42:04
载体构建，没有没切验证的话，谈何测序？
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2楼2014-03-07 21:49:42
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踏实的心

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2014-03-08 12:42:09
可能菌液抗性存在问题，我之前去华大测序就摇不起来，但在我们实验室就可以摇起来，后来发现抗生素有问题
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3楼2014-03-08 08:14:44
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蒙古狐狸

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2014-03-08 12:42:14
建议酶切，看看条带是否正确，PCR可能会有假阴性问题
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4楼2014-03-08 09:13:51
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lihe131

至尊木虫 (文坛精英)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+3, 鼓励交流 2014-03-08 12:42:20
测不出来指的是测序结果没有插入序列，还是测序失败？
如果是前者，那就是克隆错了，聚落PCR的阳性结果可能是由于模版污染了PCR体系造成的。建议重做。
如果是后者，我建议你先换个公司试试吧。有的公司测序质量和实验条件是有欠缺的。

希望对你有帮助。
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5楼2014-03-08 09:35:16
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lvbobo823

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2014-03-08 12:42:26
序列里有高级结构也会影响测序，再一个一个公司测不出来再换一家试试，有时我们在华大测不好换了博尚就好了。
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hehe
6楼2014-03-08 10:00:39
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youlinglyw

荣誉版主 (著名写手)

一匡天下

优秀版主

【答案】应助回帖

★ ★ ★
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kx444555: 金币+3, 鼓励交流 2014-03-08 12:42:31
1，你进行过酶切验证没？如果没有，很有可能是没克隆成功

2，如果对方公司测序测出来是空载，那么也是没克隆成功

3，如果测序终止或者无法进行，那应该是你的序列里含有高级结构，无法进行测序

建议验证克隆成功以及pcr引物测序
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天行健
7楼2014-03-08 11:46:57
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我很快乐3A87

新虫 (小有名气)
我也是这样的问题，老是测序失败，都失去信心了！
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只为自己所要的幸福快乐
8楼2014-03-08 13:33:38
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