| 查看: 2465 | 回复: 10 | |||
[求助]
pet32a双酶切之后，电泳条带找不到 已有3人参与
|
|||
|
小弟本科生一枚，最近在构建一种菌，可是经过了两个月的尝试，还是没有成功，愁死了，这个是学校的一个大学生训练项目，搞了这么久还没构建出菌种，我在九月之前还要做出目的蛋白的表达，对表达蛋白的性质做出研究，才能结题，现在是愁死了，求告各位大侠给予意见。 首先，我用的是X-hol和BamHI这两个酶，目的基因在2700左右，目的基因在经过PCR之后，做37度双酶切6h能跑出目的条带。这个是确定的。但是在双酶切32a质粒之后，确实无论如何也跑不出条带。后来又做了单酶切切pet-32a质粒，但是3h之后，依旧是没有任何条带出现。（声明：32a未经酶切的质粒是跑得出来的。）今日又做了分小时单酶切，做法是每半小时去一次37度酶切样品，迅速放入65度烘箱中使其中的酶失活，共切了两个小时，却还是没有跑出任何条带，这不应该啊，刚加入酶就取样的也没跑出来，这太不合理了吧！（取样：2微升跑胶。）今天的除了没有酶切过的质粒跑出来了非常明显的条带，其余的都没跑出来，是跑胶打样太少了么？ 双酶切体系：50微升 10Xbuffer tango 10微升 BamHi 2微升 X-hol 2微升 pet-32a质粒 36微升（有时质粒浓度高的话也会用25微升质粒加11微升ddH2O） 37度水浴6h 单酶切体系：20微升 buffer tango 4微升 BamHI 0.5微升 32a质粒 10微升 ddH2O 5.5微升 单酶切体系：20微升 buffer tango 4微升 X-hol 0.5微升 32a质粒 10微升 ddH2O 5.5微升 另外，跑胶电压是100V 时间是40分钟 这个应该不会有什么问题吧？ |
回复此楼» 猜你喜欢
留学--博士招生
已经有16人回复
-
化学工程，本211，求调剂，ab区不限
已经有4人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有111人回复
-
湖北师范大学招调剂啦
已经有9人回复
-
邵阳学院食品与化学工程学院硕士调剂
已经有0人回复
-
天津商业大学 生物与医药课题组招生
已经有0人回复
-
生物化工学硕招收调剂
已经有0人回复
-
广东石油化工学院2026年硕士研究生需要多名生物，制药工程，食品专业的调剂生
已经有0人回复
-
317分 一志愿江南大学 化学工程学硕 求调剂
已经有6人回复
-
化工申博
已经有3人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 求助，酶切之后，非但是没有产物，而且连原本的质粒也没跑出来
已经有6人回复
- 双酶切后如何才能让载体自连？
已经有6人回复
- 请教关于载体中酶切位点和插入片段的问题
已经有12人回复
- EcoR1酶切体系
已经有11人回复
- PET-32A重组质粒构建
已经有20人回复
- 载体酶切位点与目的片段重复
已经有13人回复
- PET-28a载体怎么解读
已经有7人回复
- 片段总是连不到T载体上
已经有22人回复
- 空质粒双酶切后出现消失的情况
已经有9人回复
- 未插入目的片段的空载体质粒怎么扩增出目的条带，求解，求真相！！！！
已经有4人回复
- 酶切产物能直接做连接反应吗
已经有5人回复
- PCR产物双酶切遇到问题，求救！！！
已经有7人回复
- 关于pET32a的HIS标签
已经有10人回复
- 双酶切后切胶回收
已经有34人回复
- 原核表达重组质粒提取
已经有7人回复
- 提质粒遇到问题
已经有13人回复
- 表达载体的构建
已经有17人回复
- 【求助/交流】纯化酶切后的膜蛋白做Western blot没条带，why？
已经有9人回复
yixinyuan
木虫 (正式写手)
- 应助: 12 (小学生)
- 金币: 6174.1
- 散金: 7
- 红花: 3
- 帖子: 558
- 在线: 162.7小时
- 虫号: 1151599
- 注册: 2010-11-20
- 专业: 生物大分子结构与功能
6楼2014-03-07 22:40:56
8楼2014-03-08 09:17:49
youlinglyw
荣誉版主 (著名写手)
一匡天下
-
专家经验: +37 - MolEPI: 1
- 应助: 136 (高中生)
- 贵宾: 0.077
- 金币: 8056.9
- 散金: 8858
- 红花: 208
- 沙发: 2
- 帖子: 1511
- 在线: 263.8小时
- 虫号: 787036
- 注册: 2009-06-04
- 性别: GG
- 专业: 认知科学
- 管辖: 生物科学
2楼2014-03-06 22:46:22
3楼2014-03-06 22:53:01
lvbobo823
铁杆木虫 (正式写手)
- 应助: 363 (硕士)
- 金币: 7753.3
- 散金: 15
- 红花: 9
- 帖子: 751
- 在线: 189.4小时
- 虫号: 819723
- 注册: 2009-07-31
- 性别: GG
- 专业: 植物遗传学
4楼2014-03-07 08:14:46
5楼2014-03-07 21:11:27
7楼2014-03-07 22:43:18
9楼2014-03-08 22:20:59
10楼2014-03-08 22:22:13
