| 查看: 8713 | 回复: 7 | |||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | |||
湖畔狂想金虫 (小有名气)
|
[求助]
菌液PCR的假阳性是什么原因造成的？
|
||
|
最近做实验时遇到这样的问题： 将目的片段与表达载体连接后，转入大肠杆菌，对其菌液PCR验证时有目的条带（同时还做了用水替代菌液的阴性对照，结果没有目的条带），但是再用酶切验证时发现，没有切下目的片段。 想知道这算假阳性吗？是什么原因造成的？ 求高人指点！万分感谢！ |
回复此楼» 猜你喜欢
不合理蛙科研实验中的趣事：实验器材的 “乌龙”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：和实验材料的 “斗智斗勇”
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有106人回复
-
蛋白质检测：精准分析，解锁生物分子的密码
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之小鼠实验：严谨设计，解析生命机制的重要载体
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之重金属检测：精准筛查，守护健康与环境的防线
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
-
纳米粒度分析
已经有3人回复
-
林科院林化所招收材料与化工专业硕士，坐标南京
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 大神救命！！！菌液PCR 出来酶切质粒没有目的条带
已经有5人回复
- 最近实验室T载体连接一直都假阳性
已经有11人回复
- 革兰氏阳性菌的PCR方法
已经有16人回复
- 连接转化假阳性提不出来质粒吗？
已经有8人回复
- 基因敲除的假阳性问题
已经有15人回复
- PCR后，质粒模板消失了，到底是什么原因啊？有没有遇到同样问题的同学啊？？
已经有4人回复
- 求助：做克隆的时候SOC培养基如果污染的话，后面菌落长出来，做PCR会有什么后果？
已经有5人回复
- 做单克隆测序是菌液好还是菌液PCR后测好?
已经有9人回复
- real time PCR NTC 阳性扩增
已经有5人回复
- 菌液PCR产物电泳图，怎么解释？
已经有12人回复
- 阳性克隆的筛选问题
已经有15人回复
- 转化后菌液PCR鉴定，没有目的条带
已经有15人回复
- 菌液PCR出现杂带是什么原因？
已经有17人回复
- 菌液PCR没东西，但是提完质粒能跑出来条带，为什么啊？
已经有16人回复
- 菌液PCR是阳性，却提不出来阳性质粒！求助
已经有31人回复
- 求帮忙分析下菌液PCR检测结果
已经有19人回复
- 菌液PCR验证又失败了
已经有15人回复
- PCR阴性对照假阳性问题
已经有25人回复
- 【求助/交流】大肠杆菌菌液，如何再扩增？
已经有13人回复
- 【求助/交流】菌液PCR鉴定阳性克隆时，总出现CK
已经有4人回复
- 【求助/交流】假阳性是什么原因造成的？
已经有7人回复
- 【求助/交流】菌液保存
已经有18人回复
- 【求助/交流】洋葱瞬时表达 假阳性
已经有6人回复
意孤城_
金虫 (正式写手)
- 应助: 32 (小学生)
- 金币: 1223.8
- 散金: 506
- 红花: 9
- 帖子: 533
- 在线: 55.6小时
- 虫号: 1600188
- 注册: 2012-02-05
- 性别: GG
- 专业: 生物材料
5楼2014-02-22 15:24:41
鬼羽帝魂
木虫 (著名写手)
- 应助: 183 (高中生)
- 金币: 3100.2
- 散金: 19
- 红花: 12
- 帖子: 1427
- 在线: 186.8小时
- 虫号: 2538789
- 注册: 2013-07-09
- 专业: 生物物理、生物化学与分子
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
|
以下均为网络资源： 引物设计不合适：选择的扩增序列与非目的扩增序列有同源性，因而在进行 PCR 扩增时，扩增出的 PCR 产物为非目的性的序列。靶序列太短或引物太短，容易出现假阳性。需重新设计引物。 靶序列或扩增产物的交叉污染：这种污染有两种原因：一是整个基因组或大片段的交叉污染，导致假阳性。这种假阳性可用以下方法解决：操作时应小心轻柔，防止将靶序列吸入加样枪内或溅出离心管外。除酶及不能耐高温的物质外，所有试剂或器材均应高压消毒。所用离心管及样进枪头等均应一次性使用。必要时，在加标本前，反应管和试剂用紫外线照射，以破坏存在的核酸。二是空气中的小片段核酸污染，这些小片段比靶序列短，但有一定的同源性。可互相拼接，与引物互补后，可扩增出 PCR 产物，而导致假阳性的产生，可用巢式 PCR 方法来减轻或消除。 |
2楼2014-02-22 10:59:02
gyesang
荣誉版主 (著名写手)
-
专家经验: +24 - MolEPI: 31
- 应助: 599 (博士)
- 贵宾: 2.689
- 金币: 24334.9
- 散金: 1088
- 红花: 88
- 沙发: 2
- 帖子: 2327
- 在线: 623.1小时
- 虫号: 849017
- 注册: 2009-09-16
- 性别: GG
- 专业: 细胞信号转导
- 管辖: 分子生物
3楼2014-02-22 12:53:38
4楼2014-02-22 13:48:51
10