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我是传奇456

金虫 (正式写手)

[求助] 请教关于载体中酶切位点和插入片段的问题 已有3人参与

往某载体中插入基因片段,我想请问:
1.两个酶切位点之间相隔10bp,我的插入片段有800左右,这样效率高吗?
2.是否片段大的话,就需要用相隔碱基数较大的两个酶切位点呢?

拜谢!
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我是传奇456

金虫 (正式写手)

引用回帖:
4楼: Originally posted by cicelyzh at 2014-02-15 12:24:10
1. 切割效率与使用的限制性内切酶有关。通常情况下,10bp间隔是没有问题的。
2. 酶切效率与插入片段大小无关,片段过大会降低连接转化效率。

我还想请教一个问题:

像18-T这种进行TA克隆的载体,当我PCR产物自带酶切位点(T载体上带有此位点),与T载体链接后,产物所在的位置是在此酶切位点上,还是在T载体上设计的TA克隆位点?

盼答复!
5楼2014-02-15 14:50:41
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查看全部 13 个回答

lvbobo823

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流! 2014-02-14 16:58:17
我是传奇456: 金币+3, ★★★很有帮助, 感谢回答。 2014-02-15 14:32:52
只要酶切处理完全,连接效率会很高。10bp大小足够酶识别酶切位点。
hehe
2楼2014-02-14 16:48:51
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2014神虫浮云

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
我是传奇456: 金币+2, 有帮助, 多谢回答。 2014-02-15 14:32:40
不行,两个酶切位点距离太近,质粒无法完成双酶切,连接很难成功
ffgtfvtyju7hjhv
3楼2014-02-14 17:29:17
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
我是传奇456: 金币+5, ★★★★★最佳答案, 感谢回答。 2014-02-15 14:32:22
gyesang: 回帖置顶 2014-02-15 16:54:44
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流! 2014-02-15 16:54:49
1. 切割效率与使用的限制性内切酶有关。通常情况下,10bp间隔是没有问题的。
2. 酶切效率与插入片段大小无关,片段过大会降低连接转化效率。
4楼2014-02-15 12:24:10
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