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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » PCR的问题 求教
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zwjxyzcl

铁虫 (初入文坛)

[求助] PCR的问题 求教 已有4人参与

我想问下各位战 我设计了P全长的引物 目的基因大概2500bp 但P出来跑胶总会是在2300左右有一条带 起初我觉得是引物特异性太差 又重设计了批引物 引物长度24nt blast也没问题 但P了一次条带仍旧在2300处左右 而且就一条带 想问下 这条到底能不能算是我的目的条带？。。。。有遇到过这种问题的朋友吗？还是电泳这东西本身就不精确？我用的marker是250bp ladder
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1楼 2014-01-18 23:48:36
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yyshpy007

禁虫 (正式写手)
★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+1, 鼓励交流！ 2014-01-19 01:00:08
zwjxyzcl: 金币+5, ★★★很有帮助 2014-01-20 15:02:25
本帖内容被屏蔽
2楼2014-01-18 23:53:40
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鬼羽帝魂

木虫 (著名写手)
PCR的时候延伸时间够不够？
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3楼2014-01-19 20:10:34
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yb19841014

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
我觉得你用的这个marker吧  上面的条带那么多  不太好分的清楚吧  如果就是一条特别单一的带的  我觉得可以继续做下去 最后测序看看
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4楼2014-01-19 21:23:50
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wangpeng227

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
测序吧，跑胶也就是大概确定。可以酶切鉴定一下，如果酶切结果正确，PCR正确的可能性很大
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5楼2014-01-19 23:03:35
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pengyaotc

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
跑胶误差存在是正常的，跟许多因素有关，比如TBE跑出来就偏大

[ 发自小木虫客户端 ]
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6楼2014-01-20 08:39:58
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zwjxyzcl

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 鬼羽帝魂 at 2014-01-19 20:10:34
PCR的时候延伸时间够不够？

谢谢回复 延伸时间是足够的
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7楼2014-01-20 15:03:16
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鬼羽帝魂

木虫 (著名写手)
引用回帖:
7楼: Originally posted by zwjxyzcl at 2014-01-20 15:03:16
谢谢回复 延伸时间是足够的...

恩   实在不行  问问老师
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8楼2014-01-20 21:07:07
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