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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 求助关于PCR中，样品DNA提取问题
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2011sust

木虫 (正式写手)

[求助] 求助关于PCR中，样品DNA提取问题 已有2人参与

我买的试剂盒说明书上面分别列出了革兰氏阴性菌和革兰氏阳性菌的操作方法，而我做的目标菌种为产甲烷细菌，既有革兰氏阴性菌又有阳性菌，应该怎么处理呢？还有希望哪位给出溶菌酶缓冲溶液（25mM的Tris-HCl，pH 8.0，2.5mM EDTA，1％的Triton X-100）的配置方法啊，谢谢了~~
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1楼 2014-01-03 13:18:48
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yang0071

木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+1, 鼓励交流！ 2014-01-10 23:25:00
分别称量好，最后溶解了，再调PH值
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2楼2014-01-03 14:05:02
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
缓冲液的成分都是分子实验常用试剂，分别配置下列母液，稀释到所需浓度。
1M Tris pH8.0
0.5M EDTA pH8.0
10% Triton X-100
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3楼2014-01-03 16:18:52
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2011sust

木虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by cicelyzh at 2014-01-03 16:18:52
缓冲液的成分都是分子实验常用试剂，分别配置下列母液，稀释到所需浓度。
1M Tris pH8.0
0.5M EDTA pH8.0
10% Triton X-100

好的，谢谢

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4楼2014-01-03 17:13:16
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2011sust

木虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by cicelyzh at 2014-01-03 16:18:52
缓冲液的成分都是分子实验常用试剂，分别配置下列母液，稀释到所需浓度。
1M Tris pH8.0
0.5M EDTA pH8.0
10% Triton X-100

请问：我买的试剂盒说明书上面分别列出了革兰氏阴性菌和革兰氏阳性菌的操作方法，而我做的目标菌种为产甲烷细菌，既有革兰氏阴性菌又有阳性菌，应该怎么处理呢？
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5楼2014-01-10 18:14:21
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 2011sust at 2014-01-10 18:14:21
请问：我买的试剂盒说明书上面分别列出了革兰氏阴性菌和革兰氏阳性菌的操作方法，而我做的目标菌种为产甲烷细菌，既有革兰氏阴性菌又有阳性菌，应该怎么处理呢？...

革兰氏阳性菌的细胞壁比较难破，所以步骤应该更加繁琐。我认为你应该采用革兰氏阳性菌的处理方法。因为DNA相对来说比较稳定，多余的步骤对于革兰氏阴性菌来说也不会造成太大的影响。
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6楼2014-01-11 01:25:22
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2011sust

木虫 (正式写手)
引用回帖:
6楼: Originally posted by cicelyzh at 2014-01-11 01:25:22
革兰氏阳性菌的细胞壁比较难破，所以步骤应该更加繁琐。我认为你应该采用革兰氏阳性菌的处理方法。因为DNA相对来说比较稳定，多余的步骤对于革兰氏阴性菌来说也不会造成太大的影响。...

谢谢

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7楼2014-01-11 22:41:20
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