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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 土壤样品保存（用于提取ＤＮＡ后下游分子生物学实验）
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lhf903

金虫 (正式写手)

[求助] 土壤样品保存（用于提取ＤＮＡ后下游分子生物学实验）

土样的保存一般都是放在-70℃长期保存，现在我的一份土样在-70℃冰箱中放了两年，其间拿出来冻融过一次，还阴干了一个晚上，含水率降到了10%左右。现在拿来提取土壤总DNA，扩增真菌18S rRNA基因，P不出来~
不知道什么原因，会不会是时间过长，样品出现问题，急求解答～
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1楼 2013-11-07 15:55:15
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miaoz2011

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰，手有余香。分子生物期待你更多精彩 。 2013-11-07 19:15:51
应该不会，可能是你的PCR程序什么的设置不恰当什么的，你需要在重新调整PCR配方，或者调整程序。即使样品出现问题，应该会有东西的。
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2楼2013-11-07 16:49:31
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lhf903

金虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by miaoz2011 at 2013-11-07 16:49:31
应该不会，可能是你的PCR程序什么的设置不恰当什么的，你需要在重新调整PCR配方，或者调整程序。即使样品出现问题，应该会有东西的。

关键是同样的程序，其他样品可以扩出来
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3楼2013-11-07 18:57:05
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better2023

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+1, 鼓励交流！ 2013-11-08 01:33:16
PCR之前，总DNA跑一次胶，看看提出来没有
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4楼2013-11-07 19:26:27
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lhf903

金虫 (正式写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by better2023 at 2013-11-07 19:26:27
PCR之前，总DNA跑一次胶，看看提出来没有

跑过，总DNA没有问题，扩增其他基因也没问题
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5楼2013-11-07 20:19:21
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miaoz2011

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
gyesang: 金币+1, 鼓励交流！ 2013-11-08 01:33:24
lhf903: 金币+10, ★★★很有帮助 2013-11-14 12:04:02
还有一种原因可能是土壤里没有真菌，这个也是有可能的
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6楼2013-11-07 21:21:15
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Hazel张健

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2013-11-08 01:33:30
lhf903: 金币+10, ★有帮助 2013-11-14 12:03:56
有没有试过取第一次PCR产物作为模板再次进行PCR？！有时候第二次可以出来了~~第一次的产物浓度太低不足以在琼脂糖凝胶电泳上验证出来~~~
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7楼2013-11-07 21:22:31
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lhf903

金虫 (正式写手)
引用回帖:
7楼: Originally posted by Hazel张健 at 2013-11-07 21:22:31
有没有试过取第一次PCR产物作为模板再次进行PCR？！有时候第二次可以出来了~~第一次的产物浓度太低不足以在琼脂糖凝胶电泳上验证出来~~~

我取5ul PCR产物跑琼脂糖，没有；如果二次PCR的话，特异性会不会不行啊，偏差会被放大吧~
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8楼2013-11-07 21:26:55
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lhf903

金虫 (正式写手)
引用回帖:
6楼: Originally posted by miaoz2011 at 2013-11-07 21:21:15
还有一种原因可能是土壤里没有真菌，这个也是有可能的

这个土壤样品中间提取过一次，能扩出真菌来，后来又在-70℃放置了好久，这次拿出来就不行了~
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9楼2013-11-07 21:28:31
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