24小时热门版块排行榜    

北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
查看: 2130  |  回复: 5

柠檬可乐星

新虫 (小有名气)

[求助] 原生动物DNA提取及PCR问题 已有1人参与

我现在做分子,材料是一种原生动物,按照文献的方法single specimen提的DNA就足够PCR扩增用的,但是没有说DNA浓度是多少。
我提的DNA最大浓度96ng/ul,模板量是4ul,但是PCR除了marker条带就什么也没有了,现在就很头疼不知道是模板浓度太低还是其他原因。想问问哪位前辈也做原生动物的,PCR成功的,您提的DNA浓度最大和最小有多少。
新手上路,问题多多,多谢指教!
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

感兴趣的

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

越努力越幸运
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhouxiaofei

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2013-10-31 09:47:49
提取主要是考虑DNA的纯度,质量如何?一般的PCR浓度在100ng-1000ng,主要取决于用的那种酶。建议用那种对模版质量要求不高的,就比较合适。还有引物建议优化。
2楼2013-10-31 09:19:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

柠檬可乐星

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by zhouxiaofei at 2013-10-31 09:19:04
提取主要是考虑DNA的纯度,质量如何?一般的PCR浓度在100ng-1000ng,主要取决于用的那种酶。建议用那种对模版质量要求不高的,就比较合适。还有引物建议优化。

您说使用对模板质量要求不高的酶,比如是什么呢?我一直用的东盛的Taq酶,您觉得有问题么?
谢谢!
越努力越幸运
3楼2013-11-01 08:10:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhouxiaofei

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
柠檬可乐星: 金币+2, ★★★很有帮助 2013-11-03 10:42:00
比如NEB 的longAmp@ Taq,M0323S,我们用的感觉不错。做鼠尾DNA提取PCR也还不错。
4楼2013-11-01 10:31:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

710002191

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
柠檬可乐星: 金币+2 2013-11-03 10:41:37
你是做哪种的,用什么提的DNA,我是做原虫的,最近也不是很顺利,但是师兄做的时候没什么问题,提取的DNA直接跑PCR,50的体系一般加2,你可以设置阳性对照,要是阳性对照没问题,那就说明没有吧,我们一般不测浓度了,
may
5楼2013-11-01 12:14:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

安小米

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

你这个模板浓度可以了,但是你的模板PCR之前跑过电泳检测没有啊?
另外引物是否合适?
6楼2014-07-03 14:41:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 柠檬可乐星 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[有机交流] 3-溴吡啶-4-甲醛合成 10+3 雪糕也能爆炸 2026-03-31 9/450 2026-04-06 00:24 by nBu锂
[考研] 285求调剂 +7 AZMK 2026-04-04 9/450 2026-04-06 00:06 by 永字号
[考研] 070300化学学硕311分求调剂 +8 梁富贵险中求 2026-04-04 8/400 2026-04-05 18:01 by 猪会飞
[考研] 求调剂 +4 wos666 2026-04-03 4/200 2026-04-05 11:48 by arrow8852
[考研] 化学357分,考研调剂 +10 .Starry. 2026-04-04 11/550 2026-04-05 10:57 by cql1109
[考研] 求调剂 +3 wos666 2026-04-03 3/150 2026-04-04 05:16 by gswylq
[考研] 282求调剂 +5 呼吸都是减肥 2026-03-31 5/250 2026-04-03 12:03 by 1753564080
[考研] 一志愿中国科学院大学265求调剂 +9 恬淡ye 2026-03-31 10/500 2026-04-03 11:10 by txp1986
[考研] 生物学硕341求调剂 +4 你笑起来像云朵 2026-04-03 4/200 2026-04-03 10:32 by macy2011
[考研] 316求调剂 +14 舟自梗 2026-04-01 18/900 2026-04-03 10:28 by linyelide
[考研] 085600 295分求调剂 +19 W55j 2026-03-30 23/1150 2026-04-03 09:53 by 千千运气
[考研] 346求调剂 +5 郑诚乐 2026-04-02 5/250 2026-04-02 16:38 by SZW_UJN
[考研] 能源动力 调剂 +3 不破不立0 2026-04-02 3/150 2026-04-02 12:46 by ffffjjjj
[考研] 085601一志愿中山大学深圳材料工程330求调剂 +8 pipiver 2026-03-30 8/400 2026-04-02 12:01 by ms629
[考研] 270调剂 +7 maxjxbsk 2026-04-02 7/350 2026-04-02 09:50 by yulian1987
[考研] 302求调剂一志愿北航070300,本科郑大化学 +8 圣日耳曼条 2026-04-01 11/550 2026-04-02 07:40 by chemdavid
[考研] 0710生物学求调剂! +6 叙述文 2026-03-31 6/300 2026-04-01 09:39 by JourneyLucky
[考研] 一志愿北京科技大学085601材料工程英一数二初试总分335求调剂 +5 双马尾痞老板2 2026-03-31 5/250 2026-04-01 09:04 by oooqiao
[考研] 274求调剂 +6 xiao爱同学 2026-03-30 6/300 2026-03-31 10:04 by cal0306
[考研] 调剂 +4 GK72 2026-03-30 4/200 2026-03-30 20:32 by dick_runner
信息提示
请填处理意见