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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 原生动物DNA提取及PCR问题
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柠檬可乐星

新虫 (小有名气)

[求助] 原生动物DNA提取及PCR问题 已有1人参与

我现在做分子，材料是一种原生动物，按照文献的方法single specimen提的DNA就足够PCR扩增用的，但是没有说DNA浓度是多少。
我提的DNA最大浓度96ng/ul，模板量是4ul，但是PCR除了marker条带就什么也没有了，现在就很头疼不知道是模板浓度太低还是其他原因。想问问哪位前辈也做原生动物的，PCR成功的，您提的DNA浓度最大和最小有多少。
新手上路，问题多多，多谢指教！
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1楼 2013-10-31 08:59:08
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710002191

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
柠檬可乐星: 金币+2 2013-11-03 10:41:37
你是做哪种的，用什么提的DNA，我是做原虫的，最近也不是很顺利，但是师兄做的时候没什么问题，提取的DNA直接跑PCR，50的体系一般加2，你可以设置阳性对照，要是阳性对照没问题，那就说明没有吧，我们一般不测浓度了，
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may
5楼2013-11-01 12:14:16
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zhouxiaofei

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2013-10-31 09:47:49
提取主要是考虑DNA的纯度，质量如何？一般的PCR浓度在100ng-1000ng，主要取决于用的那种酶。建议用那种对模版质量要求不高的，就比较合适。还有引物建议优化。
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2楼2013-10-31 09:19:04
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柠檬可乐星

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by zhouxiaofei at 2013-10-31 09:19:04
提取主要是考虑DNA的纯度，质量如何？一般的PCR浓度在100ng-1000ng，主要取决于用的那种酶。建议用那种对模版质量要求不高的，就比较合适。还有引物建议优化。

您说使用对模板质量要求不高的酶，比如是什么呢？我一直用的东盛的Taq酶，您觉得有问题么？
谢谢！
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越努力越幸运
3楼2013-11-01 08:10:20
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zhouxiaofei

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
柠檬可乐星: 金币+2, ★★★很有帮助 2013-11-03 10:42:00
比如NEB 的longAmp@ Taq，M0323S,我们用的感觉不错。做鼠尾DNA提取PCR也还不错。
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4楼2013-11-01 10:31:53
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