应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 原生动物DNA提取及PCR问题
51/1返回列表
查看: 2563  |  回复: 5
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

柠檬可乐星

新虫 (小有名气)

[求助] 原生动物DNA提取及PCR问题 已有1人参与

我现在做分子，材料是一种原生动物，按照文献的方法single specimen提的DNA就足够PCR扩增用的，但是没有说DNA浓度是多少。
我提的DNA最大浓度96ng/ul，模板量是4ul，但是PCR除了marker条带就什么也没有了，现在就很头疼不知道是模板浓度太低还是其他原因。想问问哪位前辈也做原生动物的，PCR成功的，您提的DNA浓度最大和最小有多少。
新手上路，问题多多，多谢指教！
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

感兴趣的

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
越努力越幸运
1楼 2013-10-31 08:59:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

安小米

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

你这个模板浓度可以了，但是你的模板PCR之前跑过电泳检测没有啊？
另外引物是否合适？
赞一下 回复此楼
6楼2014-07-03 14:41:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 6 个回答

zhouxiaofei

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2013-10-31 09:47:49
提取主要是考虑DNA的纯度，质量如何？一般的PCR浓度在100ng-1000ng，主要取决于用的那种酶。建议用那种对模版质量要求不高的，就比较合适。还有引物建议优化。
赞一下 回复此楼
2楼2013-10-31 09:19:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

柠檬可乐星

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by zhouxiaofei at 2013-10-31 09:19:04
提取主要是考虑DNA的纯度，质量如何？一般的PCR浓度在100ng-1000ng，主要取决于用的那种酶。建议用那种对模版质量要求不高的，就比较合适。还有引物建议优化。

您说使用对模板质量要求不高的酶，比如是什么呢？我一直用的东盛的Taq酶，您觉得有问题么？
谢谢！
赞一下 回复此楼
越努力越幸运
3楼2013-11-01 08:10:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhouxiaofei

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
柠檬可乐星: 金币+2, ★★★很有帮助 2013-11-03 10:42:00
比如NEB 的longAmp@ Taq，M0323S,我们用的感觉不错。做鼠尾DNA提取PCR也还不错。
赞一下 回复此楼
4楼2013-11-01 10:31:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 6 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭