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dong_yue

金虫 (小有名气)

[求助] RT-PCR (SYBER GREEN 染料法)内参CT值偏低 已有2人参与

本人在做荧光定量PCR,选取16srRNA作为内参,定量该株细菌某个次生代谢产物的基因表达量。
结果,内参的CT值很低,在5-15之间,大部分处理都是在10以下,而此生代谢产物那个基因的CT值在15-25之间。这种情况正常么?
请各位路过的大神指教啊~!不甚感激!!!
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dong_yue

金虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2014-01-06 15:05:43
说明目标基因的表达量比内参低很多。只要CT值落在做标准曲线时的线性范围,应该可以用,否则需要稀释模板。

那如果要稀释模板的话,目的基因的CT值会更高,或者出现无信号的情况怎么办?
3楼2014-01-06 15:13:17
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香,分子生物期待你更多精彩。 2014-01-06 16:58:28
dong_yue: 金币+5, ★★★很有帮助 2014-01-09 12:44:02
说明目标基因的表达量比内参低很多。只要CT值落在做标准曲线时的线性范围,应该可以用,否则需要稀释模板。
2楼2014-01-06 15:05:43
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shiliyusly

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
gyesang: 金币+1, 鼓励交流! 2014-01-07 10:35:28
dong_yue: 金币+5, ★★★很有帮助 2014-01-09 12:43:53
建议换内参基因,选取和目的基因CT值相近的基因
4楼2014-01-06 18:59:59
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

★
gyesang: 金币+1, 鼓励交流! 2014-01-07 10:35:40
引用回帖:
3楼: Originally posted by dong_yue at 2014-01-06 15:13:17
那如果要稀释模板的话,目的基因的CT值会更高,或者出现无信号的情况怎么办?...

1. 换与目标基因表达相差不多的内参
2. 只稀释内参的模板,不稀释目标基因的模板
5楼2014-01-07 00:48:40
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