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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » RT-PCR （SYBER GREEN 染料法）内参CT值偏低
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dong_yue

金虫 (小有名气)

[求助] RT-PCR （SYBER GREEN 染料法）内参CT值偏低 已有2人参与

本人在做荧光定量PCR，选取16srRNA作为内参，定量该株细菌某个次生代谢产物的基因表达量。
结果，内参的CT值很低，在5-15之间，大部分处理都是在10以下，而此生代谢产物那个基因的CT值在15-25之间。这种情况正常么？
请各位路过的大神指教啊~！不甚感激！！！
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1楼 2014-01-06 14:43:32
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dong_yue

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2014-01-06 15:05:43
说明目标基因的表达量比内参低很多。只要CT值落在做标准曲线时的线性范围，应该可以用，否则需要稀释模板。

那如果要稀释模板的话，目的基因的CT值会更高，或者出现无信号的情况怎么办？
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3楼2014-01-06 15:13:17
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2014-01-06 16:58:28
dong_yue: 金币+5, ★★★很有帮助 2014-01-09 12:44:02
说明目标基因的表达量比内参低很多。只要CT值落在做标准曲线时的线性范围，应该可以用，否则需要稀释模板。
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2楼2014-01-06 15:05:43
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shiliyusly

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+1, 鼓励交流！ 2014-01-07 10:35:28
dong_yue: 金币+5, ★★★很有帮助 2014-01-09 12:43:53
建议换内参基因，选取和目的基因CT值相近的基因
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4楼2014-01-06 18:59:59
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)
★
gyesang: 金币+1, 鼓励交流！ 2014-01-07 10:35:40
引用回帖:
3楼: Originally posted by dong_yue at 2014-01-06 15:13:17
那如果要稀释模板的话，目的基因的CT值会更高，或者出现无信号的情况怎么办？...

1. 换与目标基因表达相差不多的内参
2. 只稀释内参的模板，不稀释目标基因的模板
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5楼2014-01-07 00:48:40
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