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浅笑包包

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[求助] 双酶切连接已有3人参与

最近在做目的基因与载体的连接实验，已经验证目的基因和载体的双酶切是成功的，我的载体有10000多bp,比较大，目的基因大概2000bp以内，做了一个月也没有连接上去，我想请问我的连接体系怎么设置比较好，也就是载体和目的基因的比例设置多大？以前做过载体：目的基因6：1，没有成功，今天准备试一试10:1，我是不是应该把比例调大点的方向来做梯度连接呢？？求指教。

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1楼 2013-12-24 15:38:33

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浅笑包包

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引用回帖:

2楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-12-24 15:59:30
我不清楚是不是你说反了，连接体系通常目的片段的摩尔浓度要比载体的高。载体：目的片段的范围可以从1:2至1:10。我觉得2kb的片段应该不算难连。你用的是16°C连过夜？因为片段比较大，可以适当提高连接温度。

是的，写反了，我用的是16度过夜，提高温度？22度吗？