24小时热门版块排行榜    

查看: 606  |  回复: 5

浅笑包包

新虫 (小有名气)

[求助] 双酶切 连接 已有3人参与

最近在做目的基因与载体的连接实验,已经验证目的基因和载体的双酶切是成功的,我的载体有10000多bp,比较大,目的基因大概2000bp以内,做了一个月也没有连接上去,我想请问我的连接体系怎么设置比较好,也就是载体和目的基因的比例设置多大?以前做过载体:目的基因6:1,没有成功,今天准备试一试10:1,我是不是应该把比例调大点的方向来做梯度连接呢??求指教。
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

Be the change you want to see in the world.
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香,分子生物期待你更多精彩。 2013-12-24 17:02:53
我不清楚是不是你说反了,连接体系通常目的片段的摩尔浓度要比载体的高。载体:目的片段的范围可以从1:2至1:10。我觉得2kb的片段应该不算难连。你用的是16°C连过夜?因为片段比较大,可以适当提高连接温度。
2楼2013-12-24 15:59:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

浅笑包包

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-12-24 15:59:30
我不清楚是不是你说反了,连接体系通常目的片段的摩尔浓度要比载体的高。载体:目的片段的范围可以从1:2至1:10。我觉得2kb的片段应该不算难连。你用的是16°C连过夜?因为片段比较大,可以适当提高连接温度。

是的 ,写反了,我用的是16度过夜,提高温度?22度吗?
Be the change you want to see in the world.
3楼2013-12-24 16:01:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

muyouleya

铜虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香,分子生物期待你更多精彩。 2013-12-24 17:03:05
换种连接酶试试吧
4楼2013-12-24 16:17:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

woshishui916

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2013-12-25 12:15:29
不需要你们高的比例的哦
浓度上5:1
就差不多了
5楼2013-12-24 18:15:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 浅笑包包 at 2013-12-24 16:01:41
是的 ,写反了,我用的是16度过夜,提高温度?22度吗?...

可以提高到20°C左右。
6楼2013-12-25 06:39:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 浅笑包包 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[博后之家] 售SCI文章,我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +3 gy1nBQXYQJqL 2026-08-29 5/250 2026-08-29 21:22 by 4qO8zhfjr2AX
[论文投稿] 售一区SCI文章T0P,我:8O.551.O54,科目全,可十急 +3 gy1nBQXYQJqL 2026-08-29 5/250 2026-08-29 21:11 by 4qO8zhfjr2AX
[基金申请] 面上意见出来了 +8 黄鸟于飞Chao 2026-08-29 16/800 2026-08-29 20:45 by 黄鸟于飞Chao
[基金申请] 投票:  有多少人是今天查系统知道结果的? +16 爱看书的可乐 2026-08-26 18/900 2026-08-29 20:07 by winsaint
[考研] 售SCI一区文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 G6APbkg8SA6w 2026-08-29 3/150 2026-08-29 18:59 by 4FFAWE8HcgUD
[论文投稿] 售SCI一区文章,我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +3 gy1nBQXYQJqL 2026-08-29 3/150 2026-08-29 18:26 by 4FFAWE8HcgUD
[博后之家] 售SCI文章,我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +6 ASdOkHsho7FD 2026-08-28 7/350 2026-08-29 17:31 by 4FFAWE8HcgUD
[基金申请] 为什么到现在没收到通知? +4 tannykie 2026-08-29 4/200 2026-08-29 17:14 by lmz0216
[教师之家] 导师吐槽:我怎么摊上了这么个极品研究生! +9 苏东坡二世 2026-08-23 9/450 2026-08-29 14:41 by hustersqt
[公派出国] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +3 ASdOkHsho7FD 2026-08-28 4/200 2026-08-29 14:02 by jCd0dEvKHShX
[基金申请] 中青基了要发朋友圈吗? +3 349506619 2026-08-28 3/150 2026-08-29 10:49 by 木风9012
[教师之家] 售SCI-T0P文章,我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 ASdOkHsho7FD 2026-08-28 7/350 2026-08-29 09:26 by G6APbkg8SA6w
[基金申请] 2026年叶企孙基金 +4 bud_bud 2026-08-27 7/350 2026-08-29 07:23 by foolishmani
[基金申请] 基金不中,共勉 +11 eulota 2026-08-26 11/550 2026-08-28 14:22 by 火星超人xi
[基金申请] 看板上这么多中的,有点像50人群里49个人都是骗子的那种感觉…… +5 a089 2026-08-26 6/300 2026-08-27 14:05 by jonewore
[文学芳草园] 梦想 +3 myrtle 2026-08-26 3/150 2026-08-27 10:01 by angelyueyi
[基金申请] 我不理解! +15 Edward_pc 2026-08-26 23/1150 2026-08-26 20:34 by zzuzxg
[基金申请] 2026年的国家社科基金项目通讯评审的新规则与新动向、新挑战 +7 process2012 2026-08-23 10/500 2026-08-26 19:23 by hmhminy
[基金申请] 国合现在查不到了吗? +10 chengyan1220 2026-08-24 20/1000 2026-08-26 08:57 by peasantsprig
[基金申请] 在坚冰还盖着北海的时候,我看到了怒放的梅花。 (金币+10) +6 ziyangfang 2026-08-25 9/450 2026-08-25 20:26 by huagongfeihu
信息提示
请填处理意见