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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 细菌质粒提取浓度太低求助
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jsxzzxj

铜虫 (初入文坛)

[求助] 细菌质粒提取浓度太低求助 已有8人参与

我质粒提取已经好几次啦，每次提取出来浓度都是很低，我这是低拷贝质粒，想提取出质粒做转化实验，求大侠指导一下并帮我分析一下为什么我提取的质粒跑电泳结果显示浓度太低？
     我曾经加大过菌量可是结果却提不出来，我的操作步骤都是严格按照天根小量中提试剂盒的说明书上来的，求高人指导下奥。
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1楼 2013-12-23 15:01:39
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sxxuan

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+3, 鼓励回帖交流！ 2014-03-28 16:38:43
低拷贝的质粒确实 不是很好提取，所以菌液量一般是加倍的。但是菌液加倍后，相应地溶液I、II、III也应该加倍。也可以是分成两管菌来裂解，离心后上清加入到同一个纯化柱。
其实你的目的只是质粒转化，质粒转化的效率比连接产物要高，哪怕是浓度很低条带很亮，也可以先试着转化的，没必要在提取这个问题纠缠这么久
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你的日子如何，你的力量也必如何！
8楼2013-12-24 09:24:07
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zhl875891551

铁虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2013-12-24 08:20:42
天根的效率还不错啊，你试试加大菌液，最后少加些水溶解。。
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心有多大，舞台就有多大！
2楼2013-12-23 16:23:12
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天猫天猫

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+3, 鼓励交流 2013-12-24 08:20:49
1、采用加富的培养基摇菌，如用超级肉汤培养基或直接将LB培养基中的酵母粉和蛋白胨加倍，仔细调节培养基的初始pH值至中性或微微偏碱性；
2、培养基中添加170ug/ml氯霉素适当抑制菌体的增殖，促进质粒复制；
3、注意培养过程中的通气状态。
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3楼2013-12-23 16:39:51
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2013-12-24 08:20:53
多收些菌。裂解时适当增加各溶液的体积，用同一个柱子binding（多上几次）。祝好运
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4楼2013-12-24 02:18:27
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